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精华帖-www.bzwz.com奥科集团 等度洗脱和梯度洗脱的选择及条件计算

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纷繁

发布时间:2019-04-15 21:44

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等度洗脱和梯度洗脱条件的确定

对于常规样品而言,在初始设置方法时可以先参考以下初始条件设置:

20分钟内,将有机相比例从5-10%线性升高至100%,并保持一段时间以保证所有组分被洗脱出来。

如果在梯度结束后,有组分的洗脱时间超过梯度时间的25%,也就是该条件中如果有化合物在25分钟之后被洗脱出来,则需要考虑更换保留能力更弱的色谱柱更换极性更强的有机溶剂

我们可以通过以下公式来计算:

我们可以看出 ΔtG>0.25 tG,所以该方法不适合等度洗脱。

适合等度洗脱的方法要求 ΔtG<0.25tG

 

1、等度洗脱如何设置

如果你的方法适合等度洗脱,那么又该如何设置呢?

我们还以上面的这个样品为例,可以参考如下计算:

tr(avg)=(ti+tf)/2=17min

Δ%B/min=(%Bfinal-%Binitial)/tG=(100-5)/20=4.75 %B/min

等度洗脱流动相比例=(Δ%B/min x tr(avg))+%Binitial=(4.75x17)+ 5=85.75≈86%B

综上所述,如果该样品可以用等度洗脱,那么方法设置为:水相与有机相比例为1486,保持17min

方法设置时可以参考以上条件设置,如果做出来的图形不能完全满意,在此基础上微调即可。

2梯度洗脱如何设置

如果该样品需要做梯度洗脱,方法参数又该如何设置呢?

梯度洗脱主要包括以下几个参数:初始流动相比例结束流动相比例流动相变化速率,同样以之前的样品为例:

Δ%B/min=(%Bfinal-%Binitial)/tG=(100-5)/20=4.75 %B/min

调整后的初始流动相比例

Optimized%Binitial

=(%Binitial+(tixΔ%B/min))-(V/FxΔ%B/min)-10%B

=(5+(12.786x4.75))-(5.5/2x4.75)-10

=42.67%B

调整后的结束流动相比例

Optimized%Bfinal

=(%Binitial+(tfxΔ%B/min))-(V/FxΔ%B/min)-10%B

=(5+(21.142x4.75))-(5.5/2x4.75)-10

=82.36%B

通过计算得到调整后的初始流动相比例等于42.67%,调整后的结束流动相比例等于82.36%

如果按照以上计算出来的条件,流动相从42%83%,运行时间20min,得到的样品图如下所示:

在方法开发时,同学们可以在以上基础谱图下再次进行调整,直到达到满意的分离度和分析时间。


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