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淀粉的测定(上)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-03-06

一、方法选择的依据

淀粉可直接被酸水解生成葡萄糖;或被酶水解生成麦芽糖和糊精,再经酸水解生成葡萄糖,可测定葡萄糖含量(还原糖)再计算出淀粉含量。另外,淀粉经分散和酸解后具有一定的旋光性,也可用旋光法测定淀粉含量。

这里要指出的是,酸水解法不仅使淀粉水解,而且也能分解半纤维素,结果产生了具有还原力的木糖、阿拉伯糖等单糖,使淀粉测定结果偏高。

有人曾以鼓皮、小米壳、玉米及甘薯等试样用糖化酶法及直接酸水解法测定淀粉含最,结果糖化酶法均较直接水解法为低,因为直接酸水解法中淀粉与半纤维家均被水解为还原糖,而糖化酶法仅能糖化淀粉,半纤维索则不起作用,因此半纤维素留于滤渣中,将糖化后的滤液与滤渣分别水解后滴定糖,二者结果之和与直接酸水解法滴定糖的结果相接近。

从表39-2以看出,用直接酸水解法测定淀粉,易将半纤维素误作淀粉,以致得出错误的结果。

本节除介绍经典的酶水解法外,还推荐谷物种子粗淀粉测定的国家标准法—旋光法。

二、谷物种子中粗淀粉的测定(CaC12-HOAc浸提-旋光法)

1、方法原理

淀粉是多糖聚合物,可用CaC12-HOAc(相对密度1.3,pH2.3)为分散和液化剂,在一定的酸度和加热条件下,使淀粉溶解和部分酸解,生成具有一定旋光性的水解产物,,可用旋光计测定。用此法时,各种淀粉的水解产物的比旋指定为203。全国谷物淀粉分析方法标准化研究协作组认为,本法结果的重复性好,操作简便、快速。

2、仪器及设备

旋光计:电热恒温甘油浴(士1oC)。

3、试剂

(1) CaCl2-HOAc溶液:溶解5份重的CaC12•2H2O(分析纯)于6份水中,调节其相对密度(20℃时)为1.30。此溶液约含CaC12330g•L-1。再向此溶液中加入冰HOAc(每1000mL约加1.3mL冰HOAc),用pH计测试调节至pH2.3,过滤至清澈为止。

(2)硫酸锌溶液:称取ZnSO4•7H2O 30g溶于100 mL水中。

(3)亚铁氰化钾溶液:称亚铁氰化钾(K4Fe (CN )6•3H2O,分析纯)15g溶于100 mL水中。

4、操作步骤

(1)待测液制备称取磨细谷物样品2.500g,放入250 mL三角瓶中(同时测定水分),加入CaCl2-HOAc溶液10mL和6个~8个小玻璃球或大粒石英砂,轻轻摇匀,不要让样品粘在瓶底。再用CaC12-HOAc溶液50mL沿瓶壁淋洗附着在瓶壁上的样品,盖上小漏斗,放在1180±10C恒温油浴中,使之在5 min内达到恒温,继续恒温加热25 min。在加热过程中不要搅拌,使其自然分散水解(可用玻棒将瓶壁附着物推至液面以下)。煮毕立即取出,置于流水冷却槽中充分冷却(约15min),然后用30mL左右水分次无损地冲洗全部内容物转入100mL容量瓶中,加入硫酸锌溶液1mL,充分摇匀后再加入亚铁氛化钾溶液1mL,再摇匀,如有泡沫,可加几滴乙醇消除之,用水定溶,用中速滤纸过滤,弃去初滤液(15mL±20mL)。取澄清液待测。

(2)测定:测定先用清亮的待测液洗旋光管2次~3次,然后将溶液装满管中,使管口液体呈一凸起,将活动的圆玻璃片与旋光管垂直方向插入盖上(可避免留有气泡)。将管盖扭紧,检查管中是否有气泡。然后测读旋光仪上的旋光度或检糖计上的0S,取3次测读的平均数。

5、结果计算

式中;α——旋光角度的读数;
      L——旋光管长(dm);
     m——样品质量(g);
      203——淀粉的比旋。

6、注意事项

(1) CaC12-HOAc溶液的酸度必须调节至pH2.3(用酸度计调试),若pH>2.5,易使分散液粘稠,难于过滤;若pH<2.5,易引起淀粉进一步水解而降低比旋。

(2)样品中含有水溶性糖类,须先用80%乙醇洗糖,但绝大多数谷物种子中水溶性糖含量甚微,一般可忽略不计,不必进行脱糖手续。

(3) CaC12-HOAc溶液应在放入甘油浴前约5mi。加入,以防样品枯附在瓶底,影响分散效果

(4)试验证明,在加热初期搅拌,淀粉易结块;但在放入甘油浴前必须轻轻摇动,使样品均匀分散在CaC12-HOAc介质中,勿使样品粘在瓶底,必要时可用铲形玻棒将其搅开,加热后使其自然水解,测定结果的重复性较好。

三、麸皮、小米壳、玉米、甘薯、草本植物(牧草等)的茎叶中淀粉的测定(淀粉糖化酶一酸水解法)

1、方法原理

淀粉先经淀粉酶水解成麦芽糖及糊精,再经酸水解,最后成葡萄糖。测定所得到的葡萄糖量,就可计算淀粉含量。

2、仪器及设备

恒温箱(保温60℃以下孵化器)。

 

参考资料:土壤农业化学分析方法


【关键词】淀粉,葡萄糖,碳水化合物,国家标准物质网 

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