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水溶性糖的测定(三)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-03-30

2、仪器及设备

电热水浴锅。

3、试剂

(1)硫酸溶液[C(H2SO4)=l mol·L-1〕。

(2)CaCO3(化学纯);

(3)酚酞指示剂:称取酚酞指示剂0.5g,溶于100 mL的95%乙醇溶液中;

(4)夏费-索姆吉试剂:称取无水Na2CO3(分析纯)25. 0g和酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O,化学纯)25.0g放入2L烧杯中,加水约500 mL使其溶解。将一漏斗的颈端插入液面以下,在不断搅拌下,通过漏斗加硫酸铜溶液[(CuSO4·5H2O)=100g·L-1]75mL。再加入Na HCO3(分析纯)20g,溶解后再加入KI(化学纯)5g,转入1L容量瓶中,加入碘酸钾溶液〔c(KIO3)=0.0167mol·L-1〕250mL,用水定容。用砂芯坩埚过滤,放置过夜备用;

(5)碘化钾-草酸盐溶液:称取KI(化学纯)2.5g和K2C204(化学纯)2.5g溶于水中,并稀释至100 mL,每周现用现配。

(6)Na2S203标准贮存溶液[c(Na2S203·5H2O)=0.1mol·L-1]:称取Na2S203·5H2O(分析纯)25. 0g溶于1L煮沸后已冷却的水中,加入Na2CO30. 1g,盛于棕色瓶中,贮放在低温暗处。一天后进行标定;

溶液的标定称取已在130oC烘干2h K2Cr207(分析纯)0.20g(准确至0. 0001g ),放在250 mL三角瓶中,溶于含有2gKl的80 mL水中,边搅边加入盐酸溶液[c(HCI)=1mol·L-1]20 mL,在暗处放置5 min后,用Na2S203溶液滴定。当溶液由橙红色变为浅黄绿色时,加入淀粉指示剂10滴,继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色(Cr3+的颜色)为止。计算Na2S203溶液的准确浓度;

(7)硫代硫酸钠标准溶液[[c(Na2S2O3·5H2O)=0. 005mol·L-1]:稀的硫代硫酸钠标准溶液不稳定,须在使用当天用经煮沸的冷水准确稀释贮存液至恰为0.005mol·L-1;

(8)淀粉指示剂:称取可溶性淀粉1.0g和HgI2(防腐剂) 2mg,用少量水调研,溶于100mL沸水,冷却后使用。

4、操作步骤

(1)糖溶液的提取

水提取法:清除新鲜水果、蔬菜样品外来污染的杂质,尽可能快地磨细或切碎,混匀,称取样品25.00g~50.00g(含糖约2.5 g),置高速组织捣碎机中,加适量水后捣碎(或置研钵中加少量纯石英砂共同研磨),然后小心移入250mL容量瓶中,加水至约150 mL。或风干已磨细的样品则可称取0.500g~5.00g,洗入250 mL容量瓶中,亦加水至约150mL。然后加入粉状CaCO3 0.5g~1.5g中和样品中的酸度(防止浸提过程中蔗糖水解),摇动1 min,置于80℃水浴中保温浸提0.5h,其间摇动数次以利糖分浸提完全。冷却,滴加中性乙酸铅溶液(试剂2)至产生白色絮状沉淀(约2 ml~5 mL),充分摇动混合,静置15 min,再滴加几滴中性乙酸铅溶液于上部清液中检查是否沉淀完全。如果还有沉淀形成。再摇动,静置,直至不产生白色絮状沉淀为止,用水稀释定容。用干滤纸过滤。加入足量固体草酸钠到滤液中,使铅沉淀完全,再用干滤纸过滋,再加少许固体草酸钠到滤液中,检查铅是否沉淀完全。确认无铅后,滤液待用。

(2)还原糖的测定

吸取5mL(约0.5mg~2.5 mg还原糖)待测液放入25 mm×200mm试管中,加索姆吉试剂5 mL,摇动混匀。试管口盖以漏斗,在沸水浴中加热15min,小心将试管平稳地置于流动冷水浴中4min;去盖,沿管壁加入KT-K2C2O4 2 mL(溶液为碱性时不要摇动)及硫酸溶液〔试剂(1)]3 mL充分摇动混匀,使Cn2O完全溶解;再于冷水浴中放5 min,并摇动2次。然后用硫代硫酸钠标准溶液[试剂(7)〕滴定,至浅黄色时,加入淀粉5滴~10滴为指示剂,继续滴定至蓝色消失为终点。

另取蒸馏水5mL(代替的待测液)按同祥的操作进行空白标定。由空白标定与样品测定所用毫升数之差,用已知量的标准塘溶液同样进行测定,可以校验表的数值。

5、结果计算

式中:m1——查表39. 1得还原塘质量,mg;

10-3——将mg换算成g的系数;

m——吸取的待测液中相当的样品质量,g。

两次平行测定结果允许相对偏差为5%。

(三)水溶性糖总量的测定

盐酸水解-铜还原直接滴定法

1方法原理

植物水溶性糖包括葡萄糖、果糖和蔗糖。其中,蔗糖须经稀HCL水解生成转化糖(生成等量的葡萄糖和果糖)后与其它的还原糖一起测定,即为水溶性总糖。

2、仪器及设备

恒温水电俗锅。

3、试剂

(1)盐酸溶液〔c(HCI)=6mol·L-1]:浓盐酸(HCI, p=1.19g·cm-3,化学纯)与水等体积混合;

(2)氢氧化钠溶液[c(NaOH)=6mol·L-1];240g氢氧化钠(NaOH,化学纯)溶于水中冷却后稀释至1L;

(3) 夏费-索姆吉试剂与还原糖作用生成Cu2O沉淀,将沉淀用H2SO4酸化时,Cu2O即溶解成Cu+。而夏费-素姆吉试剂中的KIO3与KI在酸化时生成I2:

KIO3+5KI+3H2SO =3K2S04+3H20+3I2

试剂中的KIO3是定量加入的,所以生成的I2也是一定量的。生成的I2与Cu+发生氧化还原反应,消耗一部分I2

溶液中与Cu+反应后所剩余的I2以淀粉为指示剂,用Na2S2O3标准溶液滴定。

在测定同时做空白标定,以水代替糖试液,由空白标定消耗的Na2S2O3毫升数减去实测待测液消耗的Na2S2O3毫升数,查表39.1即得待测液中还原粮的毫克数。本方法适用于含糖少的蔬菜、牧草等样品。

参考资料:土壤农业化学分析方法

相关链接:

水溶性糖的测定(一)

水溶性糖的测定(二)


【关键词】水溶性,单糖,双糖,国家标准物质网 

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