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豆芽中植物生长调节剂残留气相色谱-质谱分析测定
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-09-25

1、适用范围

本方法适用于气相色谱-质谱联用仪对豆芽中4一氯苯氧乙酸、2,4-口乙酯,2,4-D-丁酯、萘乙酸、2,4-D、吲哚乙酸、吲哚丁酸7种植物生长调节剂残留的测定。

本方法适用于豆芽中4-氯苯氧乙酸、2,4-D-乙酯、2,4-D-丁酯、萘乙酸、2,4-D、吲哚乙酸、吲哚丁酸7种植物生长调节剂残留的测定。当试样取10.Og时,本方法各植物生长调节剂检出限为O.1mg/kg,定量限为0.03mg/kg。

2、原理

豆芽经酸性乙腈提取,盐析、离心、浓缩、复溶,部分经QuECHERS试剂盒净化后分析2,4-D-乙酯、2,4-D-丁酯。另外再经MCS固相萃取柱净化,甲醇洗脱后,用三氟化硼甲醇溶液甲酯化,然后用GC/MS测定4-氯苯氧乙酸、萘乙酸、2,4-D、吲哚乙酸、吲哚丁酸。

3、仪器与试剂

(1)仪器:气相色谱-质谱联用仪,配有自动进样器;氮吹仪;漩涡混匀器;恒温干燥箱;旋转蒸发仪;离心机;食品粉碎加工机;具塞试管、平底烧瓶等玻璃仪器。

(2)试剂:甲酸(分析纯);乙腈(分析纯);正已烷(分析纯);甲醇(色谱纯);盐酸(优级纯);氯化钠(分析纯);无水硫酸钠(分析纯),经550℃烘烤4 h,储存于干燥器中,冷却后备用;乙酸乙酯(色谱纯);MCS固相萃取柱,规格为500mg/mL(SILICA+阳离子交换树脂);QuECHERS试剂盒,规格300mg/管(含PSA+C18+石墨碳)。

试剂配制:固相萃取淋洗液配制,吸取O.33mL的盐酸与100mL纯水混合配成浓度为40mmol/L的盐酸溶液作为淋洗液;提取液,吸取体积为2mL的乙酸乙酯和8mL的正已烷配成体积比为1:4的乙酸乙酯正己烷混合液。

10%三氟化硼甲醇衍生剂:取9mL甲醇,加入1mL三氟化硼乙醚溶液,混匀,现配现用。

(3)标准品:4-氯苯氧乙酸、萘乙酸、2,4-D、2,4-D-乙酯、2,4-D-丁酯、吲哚乙酸、吲哚丁酸、纯度均大于99.O%。

①标准贮备溶液配制:1.Omg/mL植物生长调节剂贮备液:分别称取O.025g(精确到0.0001g)上述植物生长调节剂标准品,用甲醇分别溶解定容至25mL,得到1.Omg/mL植物生长调节剂贮备液,4℃保存。

②混合标准使用液配制:10.0μg/mL植物生长调节剂混合使用液:各吸取1.Omg/mL植物生长调节剂贮备液1.0mL至100mL容量瓶中,用甲醇定容至100mL,4℃保存。

4、分析步骤

(1)样品采集:样品采集的标准化是获得准确数据的基础,抽样必须是随机的和有代表性的,能反映出样品的真实情况。

(2)试样的制备和保存:将待测豆芽样品绞碎混匀待用,称取试样后将剩余试样放置于-20℃冰箱中保存,备用。

(3)提取:称取豆芽试样10g(精确至0.01g)于50mL离心管中,加入40μL甲酸,再加入20 mL乙腈,用漩涡混匀1min左右,然后超声30min,超声结束冷却后8000rpm离心5min,上清液转移至新的50mL离心管中,然后加入3.0g NaCl(使其饱和有结晶),漩涡混匀,超声10min,冷却后8000rpm离心5min,吸出乙腈层,用无水Na2S04脱水过滤至圆底烧瓶内,用旋转蒸发仪浓缩近干,在圆底烧瓶内加入2mL甲醇超声溶解。

(4)净化:取上述1mL甲醇样液,加到QuECHERS试剂管中,混匀,静止5min,进一步混匀,然后10000rpm离心2min,取上清液进行气相色谱一质谱分析,测定2,4-D_乙酯和2,4-D-丁酯。

另外取1mL甲醇样液加入9mL 40mmol/L盐酸,然后超声混匀,转移至离心管后8000rpm离心5min,上清液待净化。先用5mL甲醇、5mL水、5mL 40mmol/L的盐酸溶液活化MCS柱,活化结束后将上清液转移到MCS柱内,待样品过柱后,用5mL水淋洗除杂,真空抽干柱内液体加入5mL甲醇洗脱收集于10mL具塞试管内,洗脱液50℃下用氮气吹干待衍生。

(5)衍生:在试管内加入1.OmLlO%三氟化硼甲醇衍生溶液,涡旋混匀,70℃加热衍生30min,取出冷却后再加入1.0mL(1:4)的乙酸乙酯-正己烷混合溶液和2mL纯水,涡旋混匀,4000rpm离心5min,吸出上层有机相于已经加有约O.2g无水硫酸钠的进样瓶中,转移至进样瓶中进行气相色谱-质谱分析。

(6)样品测定:

①气相色谱参考条件:色谱柱,DB-5MS石英毛细管色谱柱或相当者(30m×O.25mm×0.25μm);色谱柱升温程序初温80℃,保持1min,然后以10℃/min升至280℃,程序运行完成后,300℃后运行5min;进样口温度220℃;进样模式,不分流进样;进样体积1μL;载气,高纯氦气,纯度≥99.999%,恒流模式,流速为1.OmL/min。

②质谱分析参考条件:电离模式:电子轰击源(EI):能量为70eV;四级杆温度150℃;离子源温度230℃;传输线温度280℃;溶剂延迟8min;质谱检测方式,选择离子扫描(SIM)采集。各植物生长调节剂色谱-质谱参数及总离子流图分别见表3—14和图3—17,图3—18是2,4-D-乙酯和2,4-D-丁酯标准总离子流图。

(7)标准曲线的制作:吸取O.05mL、O.1mL、O.2mL、O.5mL、1.OmL 10.Oμg/mL植物生长调节剂混合应用液吹干,用空白豆芽提取液进行定容至1.OmL,制备成含量为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.Oμg/mL、5.Oμg/mL、10.Oμg/mL的标准溶液,供2,4-D-乙酯、2,4-D-丁酯测定用,待气相色谱-质谱分析后绘制标准曲线。

分别吸取0.05mL、O.1mL、O.2mL、O.5mL、1.0mL 10.0μg/mL植物生长调节剂混合应用液,用甲醇定容至1.OmL,然后和样品一起进行衍生测定,制备成含量为O.5μg/mL、1.Oμg/mL、2.Oμg/mL、5.Oμg/mL、10.Oμg/mL的标准溶液,气相色谱-质谱分析后绘制标准曲线。

(8)测定:将试样溶液用同标准溶液相同仪器条件进行测定,根据测定液中植物生长调节剂的含量计算试样中植物生长调节剂的含量。根据溶液中被测植物生长调节剂的含量,选定浓度相近的标准工作溶液。

5、结果计算

气相色谱-质谱测定结果可由工作站计算机自动计算,以系列标准溶液中目标化合物的浓度为横坐标,相对应的定量离子碎片的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。根据测定液中植物生长调节剂的含量按下式(3—2—8)计算样品中植物生长调节剂的含量:

                      (3-2-8)

式中:Xi——样品中植物生长调节剂含量(mg/kg);

c——由工作站按标准系列计算出的样品测定液中植物生长调节剂的质量浓度(μg/mL);

V——样品测定液最终定容体积(mL);

m——样品称取质量(g)。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留2位有效数字(或小数点后2位)。

6、质量控制:

(1)质谱定性按照欧盟规定,定量离子和定性离子比例要在要求范围之内,保留时间定性时间窗口一般为0.02min。

(2)为了保证分析结果的准确,要求每批样品至少做一个加标回收试验,样品加标O.1mg/kg回收率为70%~120%。

参考资料:气相色谱-质谱在仪器安全监测中的应用


【关键词】气相色谱-质谱,植物生长调节剂,国家标准物质网 

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