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志贺氏菌标准检验方法(一)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-12-08

志贺氏菌(shigella)是人类重要的肠道致病菌之一,食物源性的痢疾爆发(即志贺氏菌食物中毒),主要是食用了被污染该菌的食品和水所致,其检验方法一般为增菌、分离、生物学试验及血清学鉴定。

一、检验方法

(一)操作步骤

1、增菌。称取检样25g,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内(固体食品应用均质器以8000--10000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎,粉状食品应用灭菌金属匙或玻璃棒研磨使其乳化),于36±1℃培养6~8h。

2、分离。取增菌液l环,划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个,麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个,于36±1℃培养18~24h。志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。

3、生物化学试验。挑取平板上的可疑菌落,接种三糖铁琼脂和半固体各一管,一般应多挑几个菌落以防遗漏。志贺氏菌属在三糖铁琼脂内的反应结果为底层产酸、不产气(福氏志贺菌6型可微产气),斜面产碱,不产生硫化氢,无动力,在半固体管内沿穿刺线生长。具有以上特性的菌株,疑为志贺氏菌,可做血清凝集试验。

在做血清学试验的同时,应进一步做苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸脱妒酶,西蒙氏柠檬酸盐和葡萄糖铵尿素、KCN、水杨苷、七叶苷试验,志贺氏菌属均为阴性反应。必要时应做革兰氏染色检查和氧化酶试验,应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌,并以生化试验方法做4个生化群的鉴定。见表4—1。

4、血清学试验。挑取三糖铁琼脂上的培养物,做玻片凝集试验。先用四种志贺氏菌多价血清检查,如果由于K抗原的存在而不出现凝集,应将菌液煮沸后再检查,再用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验,如系B群:福氏志贺氏菌,则用群和型因子血清分别检查,确定菌型。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表4—2,福氏志贺氏菌菌型鉴定的方法,可先用群因子血清检验,再根据辞因子血清出现凝集的结果,依次选用型因子血清检查(表4—3)。

四种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株,可用鲍氏多价血清1,2,3分别检查,并进一步用1~15各型因子血清确定菌型,如果不是鲍氏志贺氏菌,可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。

5、结果报告:综合以上生化和血清学的试验结果,判定型别并作出报告。

如果生化试验判定为痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌,由于血清种类不全而未获得血清学分型的最后结果时,可报告为“痢疾(或鲍氏)志贺氏菌,型别待定”,并送有条件的实验室进一步鉴定。

(二)检验程序

二、结果分析判定

(一)一般培养性状

志贺氏菌为需氧性革兰氏阴性无芽胞杆菌,在普通培养基上易于生长最适pH为6.4~7.8,最适温度为37℃,于10~40uC均能繁殖,在选择性或鉴别培养基上为无色,半透明,微凸起,光滑,湿润,边缘整齐,直径约2mm大小的菌落,但宋内氏志贺氏菌常出现R形菌落。在液体培养基中呈均匀混浊,无鞭毛,无动力。

(二)增菌与分离

志贺氏菌因在食品中的存活期较短,当样品采集后应尽快进行检验,如不能立即检查时,可将标本放入冰箱保存。对该菌的检验至今还没有很好的增菌方法,一般采用GN增菌液,缩短增菌时间,6~8h增菌液内细菌轻微生长,即可接种鉴别平板,以免时间较长,其他肠道非致病细菌生长过多而影响志贺氏菌的分离。

用于分离鉴别的培养基,一般不少于两个,采用中等选择性的HE或SS琼脂平板和弱选择性的麦康凯或EMB琼脂平板,以利于志贺氏菌的阳性检出率。

(三)生化学性状

根据志贺氏菌的生化学特性,均能发酵葡萄糖,不产生气体(少数福氏6型能产生少量气体),不发酵水杨苷和侧金盏花醇,不分解尿素,不产生硫化氢,在西蒙氏柠檬酸盐培养基上不生长,V-P为阴性,不发酵乳糖(宋内氏志贺氏菌可迟缓发酵),不能使赖氨酸脱羧,宋内氏菌和鲍氏B型可使鸟氨酸脱羧,其他均为阴性。

参考资料:食品卫生微生物检验标准手册


【关键词】志贺氏菌,食品卫生,微生物,国家标准物质网 

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