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志贺氏菌标准检验方法(二)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-12-09

历来以甘露醇和乳糖发酵的特性来区分志贺氏菌的生化群:

A群(痢疾志贺氏菌):为甘露醇阴性,乳糖阴性。

B群(福氏志贺氏菌)和C群(鲍氏志贺氏菌):为甘露醇阳性,乳糖阴性。

D群(宋内氏志贺氏菌):为甘露醇阳性,乳糖阳性(或迟缓发酵)。

志贺氏菌属四个群的生化特性鉴定见表4—1。

(四)血清学性状

志贺氏菌属的O抗原(菌体抗原),在血清学上有重要的鉴别意义,该菌属无鞭毛抗原,部分菌株由于K抗原(荚膜抗原)的存在,阻止了O抗原的正常凝集时,可加热处理后,再进行凝集试验。A群(志贺氏痢疾菌)包括12个血清型,其O抗原均具有单一的特异性,其中1型即志贺氏痢疾杆菌,2型为斯密氏痢疾杆菌,其他各型国内罕见。B群(福氏志贺氏菌)为1~6型,该群抗原较为复杂,每个血清型具有两种抗原,即型抗原和群抗原,区分亚型和变种(见表4—2),C群(鲍氏志贺氏菌)为1~18型,D群(宋内氏志贺氏菌)只有一个血清型。

三、培养基

(一)GN增菌液

成分:胰蛋白胨20g,葡萄糖1g,甘露醇2g,柠檬酸钠5g,去氧胆酸钠O.5g,磷酸氢二钾4g,磷酸二氢钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000mL,pH7.0。

制法:将上述成分配好,加热使溶解,校正pH,分装每瓶225mL,1150C:高压灭菌15min。

(二)麦康凯琼脂

成分:蛋白胨17g,所胨3g,猪胆盐(或牛胆盐)5g,氯化钠5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL,乳糖10g,O.01%2吉晶紫水溶液10mL,O.5%中性红水溶液5mL。

制法:将蛋白胨、豚胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中,校正pH为7.2,将琼脂加入于600mL蒸馏水中,加热溶化,将两液合并,分装烧瓶内,1210C高压灭菌15min备用,临用时加热溶化琼脂,趁热加乳糖,冷至50~55hC时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。

注:结晶紫和中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

(三)伊红美蓝琼脂(EMB)

成分:蛋白胨lOg,乳糖10g,磷酸氢二钾2g,琼脂17g,2%伊红Y溶液20mL,0.65%美蓝溶液10mL,蒸馏水1000mL,pH7.2。

制法:将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用,临用时加乳糖并加热溶化琼脂,冷至50~55℃加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。

(四)苯丙氨酸培养基

成分:酵母浸膏3g,DL-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸)2g,磷酸氢二钠1g,氯化钠5g,琼脂12g,蒸馏水1000mL。

制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面。

试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培养4h或18-24 h,滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

(五)西蒙氏柠檬酸盐琼脂

成分:氯化钠5g,硫酸镁O.2g,磷酸二氢铵lg,磷酸氢二钾lg,柠檬酸钠5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,O.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL,pH6.8。

制法:先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,1210C葑压灭菌:15min,放成斜面。

试验方法:接种培养物,于36±1℃培养4d,每天观察,阳性者斜面上有菌生长,培养基由绿色变为蓝色。

(六)葡萄糖铵琼脂

成分:氯化钠 5g,硫酸镁(MgSO4·7H20)0.2g,磷酸氢二铵lg,磷酸氢二钾lg,葡萄糖2g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL,pH6.8。

制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,加入琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀分装试管,1210C高压灭菌15min,放成斜面。

参考资料:食品卫生微生物检验标准手册

相关链接:

志贺氏菌标准检验方法(一)


【关键词】志贺氏菌,食品卫生,微生物,国家标准物质网 

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