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果汁饮料中人工合成色素的测定
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-12-10

一、目的要求

1、人工合成色素的测定原理及方法。

2、理解和熟悉高效液相色谱仪的工作原理及操作要点。

3、掌握高效液相色谱技术测定人工合成色素的方法。

二、实验原理

食品中人工合成色素用聚酰胺吸附法或用液-液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

三、实验仪器与试剂

1、试剂

①甲醇:分析纯,经滤膜(FH 0.5μm)过滤。

②乙酸铵溶液:0.02mol/L。称取1.54g乙酸铵,加水至1000mL,溶解,经滤膜(HA 0.45μm)过滤。

③氨水(2+98)的0.02mol/L乙酸铵溶液:量取氨水(2+98)O.5mL,加0.02mol/L乙酸铵溶液至1000mL。

④聚酰胺粉:过200目。

⑤甲醇一甲酸溶液:6:4。量取甲醇60mL,甲酸40mL,混匀。

⑥柠檬酸溶液:200g/L。称取20g柠檬酸,加水至100mL,振摇溶解。

⑦乙醇-氨水-水溶液:7:2:1。取无水乙醇70mL,氨水20mL,水10mL混匀。

⑧三正辛胺-正丁醇溶液:5:95。量取三正辛胺5mL,加正丁醇95mL,混匀。

⑨饱和硫酸钠溶液。

⑩硫酸钠溶液:20g/L。称取20g硫酸钠,溶解于1000mL蒸馏水中,振摇溶解。

⑪正己烷:分析纯。

⑫pH=6水:在水中加200g/L柠檬酸调pH到6。

⑩着色剂标准溶液:柠檬黄、13落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝按其纯度折算为100%质量,配成1.00mg/mL的pH=6水溶液,临用时加pH=6水稀释成50.0μg/mL。经滤膜(HA0.45μm)过滤。

2、仪器

高效液相色谱仪,紫外检测器。

四、实验步骤

称取20.0~40.0g橘子汁,放入100mL烧杯中。含二氧化碳的样品加热驱除二氧化碳。

2、色素提取

①聚酰胺吸附法:样品溶液加200g/L柠檬酸调至pH=4,加热至600C,将lg聚酰胺粉加少许水调成糊状,倒入样品溶液中,搅拌片刻,以G3垂熔漏斗抽滤,用600C的水(pH=4)洗涤3~5次,然后用甲醇一甲酸混合液洗涤3~5次(含赤藓红的样品不能洗),再用水洗至中。用乙醇-氨水-水混合液解吸3~5次,每次5mL,收集解吸液,加乙酸中和,蒸发至近干,加水溶解,定容至4mL。经滤膜(HAO.45μm)过滤,取lOμL进高效液相色谱仪。

②液-液分配法(适用于含赤藓红的样品):将制备好的样品溶液放入分液漏斗中,加20mL盐酸、三正辛胺-正丁醇溶液(5+95)10~20mL,振摇,提取,分取有机相。重复此操作,合并有机相,用饱和硫酸钠溶液洗2次,每次10mL,分取有机相,放至蒸发皿中,水浴加热浓缩至10mL,转移到分液漏斗中,加入60mL正己烷,混匀。加氨水(2+98)提取2~3次,每次5mL。合并氨水层(含水溶性色素),用正己烷洗2次,氨水层加乙酸调成中性,水浴加热蒸发至近干,加水溶解,定容至5mL。经滤膜(HA0.5μm)过滤,取lOμL进高效液相色谱仪。

3、高效液相色谱条件

①色谱柱:YWG-C18,4.6mm×250mm,10μm,不锈钢柱。

②流动相:甲醇:0.02mol/L的CH3COONH4溶液(pH=4)。

③梯度洗脱:甲醇20%~35%,3%/min;35%-98%,9%/min;98%继续6min。

④流速:1mL/min。

⑤检测器:紫外检测器,波长254nm。

根据保留时间定性,外标峰面积法定量。

五、结果处理

1、数据记录

2、结果计算

                              (8-5)

式中:X——样品中着色剂的含量,g/kg;

m1——进样体积中着色剂的质量,mg;

V2——进样体积,mL;

V1——进样稀释液体积,mL;

m——取样品质量,g。

六、注意事项

1、样品在加入聚酰胺粉吸附色素之前,要用200g/L柠檬酸调至pH=4,因为聚酰胺粉在偏酸性(pH=4~6)条件下对色素的吸附能力较强,吸附较完全。

2、如果样品色素浓度太高,要用水适当稀释,因为在浓溶液中,色素钠盐的钠离子不容易解离,不利于聚酰胺粉吸附。

3、样液中的色素被聚酰胺粉吸附后,当用热水洗涤聚酰胺粉以便除去可溶性杂质时,要求水偏酸性,防止吸附的色素被洗脱下来,使定量结果偏低。

4、在提纯的样品溶液进行蒸发浓缩时,要控制水浴温度在70~800C之间,使其缓慢蒸发,勿溅出皿外,另外要经常摇动蒸发皿,防止色素干结在蒸发皿的壁上。

参考资料:食品中有毒有害物质检测


【关键词】果汁,饮料,人工合成色素,食品,国家标准物质网 

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