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三羟甲基氨基甲烷(Tris)为弱碱,分子式为C4H11NO3,分子量为121.14,在25 °C下pKa为8.1,其缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0~9.2之间。在生物化学实验中常用的pH值为6.8、7.4、8.0、8.8。Tris被广泛用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备,甚至有超过磷酸盐缓冲液的趋势。
磷酸盐缓冲液(PBS)是以磷酸盐为pH缓冲,氯化钠为渗透压平衡的盐溶液,通常使用的有磷酸钠缓冲液和磷酸钾缓冲液。由于它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广,是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲溶液。
Tris缓冲溶液 在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系稳定pH值;在凝胶中使用Tris-HCl缓冲体系稳定pH值;被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂;Tris缓冲液的低离子强度特点还可用于线虫的中间纤维的形成;在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”,可用于DNA的稳定和存储;将调节pH值的酸溶液换成乙酸,获得“TAE缓冲液”,换成硼酸可获得TBE缓冲液。这两种缓冲液常用于核酸电泳实验中。
磷酸盐缓冲溶液一般的有活性的生物制剂都要用磷酸盐缓冲溶液来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整适宜pH值的缓冲作用。蒸馏水不具有盐平衡作用,会破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以使用PBS是首选。当然,PBS也不是万能的,有的生物活性物质需要的条件比较高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。因此PBS主要用于细胞实验,其缓冲范围最适宜在中性。
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