点击接通在线客服
猪肉和鸡肉中7种氟喹诺酮类药物残留检测方法——高效液相色谱一串联质谱法(一)
【来源/作者】周世华 【更新日期】2017-01-04

1、安全要求

实验操作时穿工作服、戴口罩和手套;提取和净化操作都应在通风橱中进行,避免溶剂气体吸入和皮肤接触;废弃的化学试剂收集到专用容器中集中处理。

2、急救措施

皮肤接触到有机溶剂或酸、碱溶液后用清水清洗,有机溶剂或酸、碱溶液溅人眼中用清水灌洗。

3、适用范围

该标准操作规程适用于猪肉和鸡肉中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、二氟沙星和沙拉沙星单个或混合物残留量的确证检测。

4、职责

进行该项检验的检验员必须按该标准操作规程进行检验,质量监督员负责监督该标准操作规程的正确执行。

5、检测原理

试料中残留的氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、二氟沙星和沙拉沙星用含1%甲酸乙腈溶液提取,MCX固相萃取柱净化后,以诺氟沙星-D5作内标,高效液相色谱-串联质谱法测定,内标法定量。

6、方法灵敏度

氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、二氟沙星或沙拉沙星在猪肉和鸡肉中的检测限均为5μg/kg,定量限均为10μg/kg。

7、注意事项

过柱净化时上样、淋洗、洗脱的流速保持在1~2mL/min。

8、材料、仪器、试剂的准备及基本要求

除特别注明外,以下所用试剂均为分析纯;水为符合GB/T 6682规定的一级水。

8.1.1 氧氟沙星 含氧氟沙星(C18H20FN3O4)不得少于99.0%。

8.1.2 诺氟沙星 含诺氟沙星(C16H18FN3O3)不得少于99.0%。

8.1.3 盐酸环丙沙星 含盐酸环丙沙星(C17H18FN3O3·HCl)不得少于99.0%。

8.1.4 恩诺沙星 含恩诺沙星(C19H22FN3O3)不得少于99.0%。

8.1.5 甲磺酸达氟沙星 含甲磺酸达氟沙星(C19H20FN3O3·CH4O3S)不得少于99.0%。

8.1.6 盐酸二氟沙星 含盐酸二氟沙星(C21H19F2N3O3·HCl)不得少于99.0%。

8.1.7 沙拉沙星 含沙拉沙星(C20H17F2N2O3)不得少于99.0%。

8.1.8 诺氟沙星-D5 含诺氟沙星(C16H13FN3O3-D5)不得少于99.0%

8.1.9 甲酸

8.1.10 乙腈 色谱纯

8.1.11 甲醇 色谱纯

8.1.12 l%甲酸乙腈溶液 取甲酸lmL,加乙腈稀释至100mL,即得。

8.1.13 0.1%甲酸甲醇溶液 取甲酸100μl,加甲醇稀释至100ml,即得。

8.1.14 0.1%甲酸水溶液 取甲酸100μl,加水稀释至100ml,即得。

8.1.15 标准储备液配制(1mg/mL) 分别取氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、二氟沙星和沙拉沙星7种对照品各约25mg,精密称定,置同一25mL量瓶中,用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解并用甲醇稀释定容至刻度,摇匀即得。置-200C冰箱中保存,有效期为6个月。

8.1.16 内标储备液配制(1mg/mL) 精密称取诺氟沙星-D5对照品约lOmg,置10mL棕色量瓶中,用0.03moL/L氢氧化钠溶液溶解并用甲醇稀释定容至刻度,摇匀即得lmg/mL的内标储备液。置-20℃冰箱中保存,有效期为3个月。

8.1.17 标准工作液配制(1μg/mL) 精密量取标准储备液0.1mL,置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀即为10μg/mL的标准工作液;从中精密量取1.0mL,置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀即为1μg/mL 的标准工作液。置-200C冰箱中保存,有效期为3个月。

8.1.18内标工作液(1μg/mL) 精密量取内标储备液0.1mL,置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀即为10μg/mL的标准工作液;从中精密量取1.0mL,置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀即为1μg/mL 的内标工作液。置-200C冰箱中保存,有效期为3个月。

8.2 仪器和设备

8.2.1 高效液相色谱一串联质谱仪(配电喷雾离子源)

8.2.2 天平 感量0.01g

8.2.3 分析天平 感量0.00001g

8.2.4 固相萃取装置(配真空泵)

8.2.5 样品浓缩器

8.2.6 涡旋混合器

8.2.7 振荡器

8.2.8 离心机

8.2.9 鸡心瓶 50mL

8.2.10 离心管 15mL

8.2.11 固相萃取柱Oasis MCX小柱(60mg/3mL)

8.2.12 微孔滤头 0.45μm

9、检验步骤

9.1 试料的制备

9.1.1 取绞碎后的供试样品,作为供试试料。

9.1.2 取绞碎后的空白样品(2±0.02)g,作为空白试料(阴性对照)。

9.1.3 取绞碎后的空白样品(2±0.02)g,添加1μg/mL的标准工作液和内标工作液各0.1mL,作为空白添加试料(阳性对照)。

9.2 提取

9.2.1 取(2±0.02)g试料,置50mL离心管中,加2g无水硫酸钠,加1%甲酸乙腈溶液8mL,涡旋混合提取10s,8000r/min离心10min,转移上清液至另一离心管内。

9.2.2 再用1%甲酸乙腈溶液8mL重复提取1次,合并上清液,作为备用溶液。

9.3 净化

9.3.1 固相萃取柱依次用甲醇、水各3mL预洗活化。

9.3.2 取全部备用液过柱,用2%甲酸水溶液和甲醇各3mL淋洗,减压抽干。

9.3.3 用5%氨水甲醇溶液3mL洗脱,收集洗脱液,减压抽干。洗脱液于50℃下氮气吹

干,用初始比例流动相1.0mL溶解,涡旋混匀,过滤膜后,供高效液相色谱一串联质谱仪测定。

9.4 测定

9.4.1 色谱条件

9.4.1.1 色谱柱:XBridge C18150mm×2.1mm(i.d.),粒径5μm,或相当者;

9.4.1.2 柱温:300C;

9.4.1.3 进样量:10μL;

9.4.1.4 流动相A:0.1%甲酸甲醇溶液;

流动相B:0.1%甲酸水溶液;

流动相梯度洗脱条件见表1。

9.4.2 质谱条件

9.4.2.1 离子源参考参数见表2。

9.4.2.2质量分析器参考参数见表3。

9.4.2.3 光电倍增器电压:650V。

9.4.2.4 氟喹诺酮类药物定性、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表4。

参考资料:兽药残留检测标准操作规程


【关键词】氟喹诺酮,液相色谱,串联质谱法,奥科官网,北京世纪奥科 

<< 上一篇:絮凝剂性能试验方法

>> 下一篇:2017酸酯系列来袭