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部分土壤酶活性的测定方法(三)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-02-25

5、结果计算

式中: ω(C6H5NO3)——单位时间内对硝基苯酚的产生量,mg · kg-1h-1;

m1——测试溶液中对硝基苯酚的质量,mg;

m2——样品质量,g;

k——水分系数。

6、注意事项

为消除土壤浸出液颜色的影响,应做对照:1.00g土样中加入0.2mL甲苯、4mL缓冲溶液、CaC12溶液1mL和NaOH溶液4mL,再加1mL对硝基苯磷酸盐溶液,轻摇几秒钟后,立即过滤。

四、磷酸二脂酶活性的测定(双对硝基苯磷酸盐法)

1、方法原理

通过用比色法测定磷酸二酯酶水解双p-硝基苯磷酸脂反应后释放的对硝基苯酚的含量,来估计其活性。

2、仪器

50mL三角瓶,恒温培养箱或恒温水浴;光电比色计或分光光度计。

3、试剂

所用试剂均为分析纯。

(1)甲苯;

(2)三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液(THAM)(c(C2H8O3N3)=0.05mol · L-1, pH8.0]:称取6.1g THAM溶入800mL蒸馏水中,用硫酸溶液[c(H2SO4)=0.1mol · L-1)调pH至8.0,用蒸馏水定容至1L;

(3)氯化钙〔c (CaC12)=0.5 mol·L-1]溶液:称取73.5g的CaC12·2H2O于700 mL水中,溶解后稀释至1L;

(4)双对硝基苯磷酸钠(BPNP)溶液[(c (C12H8O8N2PNa)=0.05mol·L-1) ]:称取0.906g的BPNP,溶于pH8的THAM缓冲液40mL,然后用同一缓冲溶液稀释至50mL低温贮存备用;

(5)三(羟甲基)氨基甲烷一NaOH漫提剂(THAM-NaOH):称取12.2g的THAM溶于800mL蒸馏水中,用氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.5mol·L-1]调pH至12,再用蒸馏水定容至1L。

4、操作步骤

将1.00g新鲜土样(<2mm)放置于50mL三角瓶中,然后加入0.2 mL甲苯、4mLpH8.0的THAM缓冲液及1mL的双对硝基苯磷酸脂溶液。轻摇混匀并塞上瓶塞。在370C下培养lh。然后加入1mL的0.5mol·L-1的CaC12溶液和4mL的THAM-NaOH浸提剂,轻摇几秒钟后,滤纸过滤。测定方法和标准曲线的配制同磷酸单酯酶的测定。

5、注意事项

为消除土壤浸出液颜色的影响,应做对照:1.00g土样中加入0.2mL甲苯、4mL缓冲溶液,0. 5mot·L-1 CaC12溶液1mL和0.5 mol·L-1的THAM-NaOH溶液4mL,然后再加入1mL的BPNP溶液,轻摇几秒钟后,立即过滤。

五、芳基硫酸酶的测定(对硝基苯磺酸法)

土壤中含有多种类型的硫酸酶,它们能够水解有机硫酸酯类化合物。其中研究最多的是芳基硫酸酶,能够催化下列反应:

该反应是不可逆反应。反应释放的硫酸根是植物硫家营养的一个重要来源。因此,该过程在土壤硫素循环和植物的硫家营养方面具有重要意义。

1、方法原理

通过用比色法测定芳基硫酸酶水解对硝基苯磺酸脂反应后释放的对硝基苯酚的含量,来估计芳基硫酸酶的活性。

2、仪器

50mL三角瓶;恒温培养箱或恒温水浴;光电比色计或分光光度计。

3、试剂

所用试剂均为分析纯。

(1)甲苯;

(2)乙酸缓冲液〔c(CH3COOH)= 0.5 mol·L-1, pH5.8]:称取68g三水乙酸钠(CH3000Na ·3H2O)于700 mL水中,然后加入1.70mL的冰乙酸(99%),用水稀释至IL。

(3)对硝基苯磺酸钾溶液[[c(C6H4NO3SO3K)=0.5mol·L-1)]:称取0.643g对硝基苯磺酸钾溶于40mL的乙酸缓冲液中,然后用同一缓冲溶液稀释至50mL,低温贮存备用。

(4) CaC12[c (CaCl2)=0.5 mol·L-1〕溶液:称取73.5gCaCl2·2H2O于700mL水中,溶解后稀释至1L。

(5) NaOH[c(NaOH)=0.5 mol·L-1)]溶液:称取20.0g NaOH于700mL水中,溶解后稀释至1L。

4、操作步骤

将1.00g新鲜土样(<2mm)放置于50mL三角瓶中,然后加入0.25mL甲苯、4mL乙酸缓冲液和1mL对硝基苯成酸钾溶液。轻摇混匀并塞上瓶塞。在370C下培养1h,然后加CaC12溶液1mL和NaOH溶液4mL,轻摇几秒钟后,滤纸过滤。用分光光度计在400nm~420nm处比色测定溶液(黄色)的吸光值,成用光电比色计加蓝滤色片测定。

5、注意事项

需做对照:取1.00g土样,依次加入0.25mL甲苯、4mL乙酸缓冲液、CaCl2溶液1mL和NaOH溶液4mL后,再加入1mL对硝基苯成酸钾溶液,立即轻摇几秒钟并用滤纸过滤、比色。

参考资料:土壤农业化学分析方法

相关链接:

部分土壤酶活性的测定方法(一)

部分土壤酶活性的测定方法(二) 


【关键词】土壤酶,酶活性,酶,国家标准物质网 

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