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蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-07-04

一、实验目的

掌握蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的酶活性抑制法检测技术;了解酶活性抑制检测法的原理和应用。

二、实验原理

乙酰胆碱在乙酰胆碱酯酶作用下水解,水解产物胆碱与二硫双对硝基苯甲酸(DTNB)反应形成黄色溶液。有机磷和氨基甲酸酯类农药在生物体内和离体条件下都能抑制乙酰胆碱酯酶的活性,使水解反应受到抑制,从而使水解产物的量减少,与二硫双对硝基苯甲酸发生反应的程度降低,颜色变浅。用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值,计算出抑制率,其抑制率与农药的浓度呈正相关。

三、药品试剂

1、提取液

称取11.9g无水磷酸氢二钠和3.2g磷酸二氢钾,用1000mL蒸馏水溶解(溶解后pH为8)。

2、酶液

乙酰胆碱酯酶加少许提取液摇匀后置4℃备用。配制好的酶液在4℃保存可使用3d(按使用说明操作)。

3、底物

称取56~58mg碘化硫代乙酰胆碱(S-acetylthiocholine iodide,ATCI),用少许提取液溶解,摇匀后置于4℃冰箱中备用。

4、显色剂

称取79~80mg二硫双对硝基苯甲酸,用少许蒸馏水溶解。

四、操作步骤

1、检液制备

①用不锈钢管取样器取不同植株叶片(至少8~9片叶)的样品,用天平准确称取1g。注意,取样要有代表性,果菜从表皮至果肉1~1.5cm处取样。

②将叶片剪成lcm大小,置于小烧杯中,加入5mL提取液浸没叶片,室温放置20min,每3min摇动下小烧杯,使蔬菜中的农药能充分溶入液体内。

③将烧杯中的提取液倒入试管中,略沉淀后用移液管吸取上清液2.5mL,移入另一支试管中,即为检液。

2、测试

(1)调“0”及调“100”:仪器使用一段时间或刚开始使用时,需要校正仪器工作状态,即调“0”及调“100”。目的是使仪器的检测效果保持准确。

首先,使系统处于样品分析进程中,在仪器采样稳定的情况下,开始调“0”及调“100”。调“0”时用黑色比色皿或其他物体完全阻挡住光路,当采样数据或采样曲线稳定后,点击调“0”按钮完成调“O”;调“100”时用透明比色皿或直接测试光路,当采样数据或采样曲线稳定后,点击调“100”按钮完成调“100”。

(2)“对照”测试:取2.5mL提取液,加0.1mL酶液及0.1mL显色剂,混匀后放入37℃恒温水浴15min。15min到达时,立刻加入0.1mL底物混匀,此时检液开始显色反应,应立即放入仪器中按“对照”键,3min后显示测试结果,此结果即为空白对照值。注意,溶液配比为2.5:0.1:0.1:0.1,若测3次,则相应将上述溶液量扩大3倍为7.5:0.3:0.3:0.3,余类推。

(3)样品测试每一支检液管内加0.1mL酶液及0.1mL显色剂,混匀后放入37℃恒温水浴15min。15min到达时,立刻加入0.1mL底物混匀,此时也立即放入比色池中,按“样品”键,3min后显示抑制率。注意,酶液与底物切忌长时间置于室温中,用完后立即放入4℃冰箱中;本测试法所指室温为25~35℃,若室温低于25℃时,建议使用恒温水浴;所用各种玻璃容器在使用前需用自来水洗5遍,用蒸馏水冲2遍,烘干后再使用。

五、结果计算

结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。通过测定抑制率;判断样品中是否可能含有有机磷和氨基甲酸酯农药。如果抑制率大于70%(或50%),则为阳性,结论为不安全,且可信度较高,蔬菜中肯定含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。抑制率大于70%(或50%)的样品要重复检测2次以上,几次重复检测的重现性应在80%以上,方可做出肯定结论。抑制率小于50%,认为安全;如果需要仲裁,则需进一步用其他仪器检测。

在结论中,应记录样品名称、样品来源、检测日期、检测人及检测结果(抑制率)。

参考资料:农药残留分析


【关键词】有机磷,基甲酸酯,农药残留国家标准物质网 

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