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维生素的测定(一)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-10-31

一、概述

维生素是维持人体正常生理功能所必需的一类有机营养素。食品中维生素的含量都很低,因此,对维生素的分析需采用精密度高的分析方法。主要方法有比色法、紫外分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、荧光法等。另外,化学分析法中的滴定法,具有简便、快速、不需特殊仪器等优点,为广大基层实验室所普遍采用。

二、脂溶性维生素的测定

(一)维生素A和维生素E的测定——高效液相色谱法

1、原理

试样中的维生素A及维生素E经皂化处理后,将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。

用高效液相色谱反相柱(RP—C18),将维生素A和维生素E分离,经紫外检测器检测,并用内标法定量测定。

2、仪器

①高效液相色谱仪(带紫外检测器)。

②旋转蒸发器。

③速离心机。

④离心管:具塑料盖,1.5~30mL塑料离心管(与高速离心机配套)。

⑤高纯氮气。

⑥恒温水浴锅。

⑦外检测器。

3、试剂

①无水乙醚:不含有过氧化物。

a.过氧化物的检查方法用2mL乙醚,加1mL10%碘化钾溶液,振摇1min,如有过氧化物则放出游离碘,水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉溶液,水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。

b.去除过氧化物的方法重蒸馏乙醚时,瓶中放入纯铁丝或铁末少许,弃去10%初液和10%残馏液。

②无水乙醇:不得含有醛类物质。

d.检查方法取2mL银氨溶液于试管中,加入少量乙醇,摇匀,再加入氢氧化钠溶液,加热,放置冷却后,若有银镜反应则表示乙醇中有醛。

b.脱醛方法取2g硝酸银溶于少量水中,取4g氢氧化钠溶于温乙醇中,将两者倾入1L乙醇中,振摇后,放置暗处2d(不时摇动,促进反应),经过滤,置蒸馏瓶中蒸馏,弃去初蒸出的50mL。当乙醇中含醛较多时,硝酸银用量适当增加。

③无水硫酸钠。

④甲醇:重蒸后使用。

⑤重蒸水:水中加少量高锰酸钾,临用前蒸馏。

⑥抗坏血酸溶液(100g/L):临用前配制。

⑦氢氧化钾溶液(1+1)。

⑧氧化钠溶液(100g/L)。

⑨酸银溶液(50g/L)。

⑩氨溶液:加氨水至硝酸银溶液(50g/L)中,直至生成的沉淀重新溶解为止,再加氢氧化钠溶液(100g/L)数滴,如发生沉淀,再加氨水直至溶解。

⑪维生素A标准溶液:视黄醇(纯度85%)或视黄醇乙酸酯(纯度95%)经皂化处理后使用。用脱醛乙醇溶解维生素A标准品,使其浓度大约为lmL相当于1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。

⑫生素E标准溶液:a-生育酚(纯度95%)、γ-生育酚(纯度95%)、δ-生育酚(纯度95%)。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品,使其浓度大约为1mL相当于1mg三种生育酚。临用前用紫外分光光度计分别标定此三种生育酚溶液的准确浓度。

⑬内标溶液:称取苯并[e]芘(纯度98%),用脱醛乙醇配制成每1mL相当1Oμg苯并[e]芘的内标溶液。

4、操作方法

(1)试样处理

①皂化:准确称取1~10g试样(含维生素A约3μg,维生素E各异构体约为40μg)于皂化瓶中,加30mL无水乙醇,进行搅拌,直到颗粒物分散均匀为止。加入5muO%抗坏血酸、苯并[P]芘标准液2.OOmL,混匀,加10mL氢氧化钾溶液(1+1),混匀。于沸水浴回流30min,使皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。

②提取:将皂化后的试样移入分液漏斗中,用50mL水分2~3次洗皂化瓶,洗液并入分液漏斗中,用约100mL乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣,乙醚液并入分液漏斗中。如有残渣,可将此液通过有脱脂棉的漏斗滤入分液漏斗中。轻轻摇动分液漏斗2min,静置分层,弃去水层。

③洗涤:用约50mL水洗分液漏斗中的乙醚层,用pH试纸检验直至水层不显碱性(最初水洗轻摇,逐次振摇强度可增加)。

④浓缩:将乙醚提取液经过无水硫酸钠(约5g)滤入与旋转蒸发器配套的250~300mL球形蒸发瓶内,用约100mL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次,并入蒸发瓶内,并将其接至旋转蒸发器上,于55℃水浴中减压并回收乙醚,待瓶中剩下2mL乙醚时,取下蒸发瓶,立即用氮气吹掉乙醚,立即加入2.OOmL乙醇,充分混合,溶解提取物。

将乙醇液移入一小塑料离心管中离心5min(5000r/min)。上清液供色谱分析。如果试样中维生素含量过少,可用氮气将乙醇液吹于后,再用乙醇重新定容,并记下体积比。

(2)标准曲线的绘制

①维生素A和维生素E标准浓度的标定:取维生素A和各维生素E标准液若干微升,分别稀释至3.OOmL乙醇中,并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件如表5—3所示。

浓度按下列公式计算:

式中 :cl——维生素的浓度,g/mL;

A——维生素平均紫外吸光值;

V——加入标准液的量,μL;

E——某种维生素1%吸光系数;

——标准液稀释倍数。

参考资料:食品检测技术


【关键词】维生素,食品检测,成分,检测,国家标准物质网 

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