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维生素的测定(三)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-11-02

②试样测定:吸取试样纯化液lmL于比色皿中,以下操作同标准曲线的绘制。

5、计算

                        

式中:x——试样中维生素D的含量,mg/lOOg;

p——标准曲线上查得试样溶液中维生素D含量,μg/mL,如按国际单位,每国际单位=0.025μg维生素D;

V——试样提取后用三氯甲烷定容的体积,mL;

m——试样质量,g。

6、说明及注意事项

①本方法是AOAC选定的正式方法。本方法不能区分维生素D2和维生素D3,测定值是两者的总量。

②食品中维生素D的含量一般很低,而维生素A、维生素E、胆固醇、甾醇等成分的含量往往都大大超过维生素D,严重干扰维生素D的测定,因此,测定前必须经柱色谱除去这些干扰成分。

③操作时加入乙酰氯可以消除温度的影响,可使灵敏度比仅用三氯化锑提高约3倍,并可减少部分甾醇的干扰。

三、水溶性维生素的测定——维生素C的测定(2,4-二硝基苯肼比色法)

1、原理

总维生素C包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。用酸处理过的活性炭把还原型维生素C氧化为脱氢维生素C,再继续氧化为二酮古乐糖酸,二酮古乐糖酸再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,根据脎在硫酸溶液中的含量与维生素C含量成正比,进行比色定量。

2、仪器

①恒温箱:370C±O.50C。

②可见-紫外分光光度计。

③捣碎机。

3、试剂

①硫酸(4.5mol/L) 小心地加250mL浓硫酸(相对密度1.84)于700mL水中,冷却后用水稀释至1000mL。

②85%硫酸:小心地加900mL浓硫酸(相对密度1.84)于100mL水中。

③2,4-二硝基苯肼溶液(20g/L):溶解2g 2,4-二硝基苯肼于100mL硫酸(4.5mol/L)中,过滤。不用时保存于冰箱中,每次用前必须过滤。

④草酸溶液(20g/L):溶解20g草酸(H2C204)于700mL水中,稀释至1000mL;

⑤草酸溶液(10g/L):取500mL草酸溶液(20g/L)稀释至1000mL。

⑥硫脲溶液(10g/L):溶解5g硫脲于,500mL草酸溶液(10g/L)中。

⑦硫脲溶液(20g/L):溶解10g硫脲于500mL草酸溶液(10g/L)中。

⑧盐酸(1。Mol/L):取100mL盐酸,加入水中,并稀释至1200mL。

⑨维生素C标准溶液:称取100mg纯维生素C溶解于100mL草酸溶液(20g/L)中,此溶液每毫升相当于1mg维生素C。

⑩活性炭:将100g活性炭加到750mL盐酸(1mol/L)中,回流1~2h,过滤,用水洗数次,至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110℃烘箱中烘干。

检验铁离子的方法:利用普鲁土蓝反应,将亚铁氰化钾(20g/L)与1%盐酸等量混合,将上述洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀。

4、操作方法

(1)试样的制备

①鲜样的制备:称取100g鲜样及吸取lOOmL20g/L,草酸溶液,倒入捣碎机中打成匀浆,取10~40g匀浆(含1~2mg维生素C)倒入100mL容量瓶中,用草酸溶液(10g/L)稀释至刻度,混匀。

②干样制备:称1~4g干样(含1~2mg维生素C)放入乳钵内,加入草酸溶液(10g/L)磨成匀浆,倒入100mIL容量瓶中用草酸溶液(10g/L)稀释至刻度,混匀。

将上述试样过滤,滤液备用。不易过滤的试样可用离心机离心后,倾出上清液,过滤,备用。

(2)氧化处理:取25mL上述滤液,加入2g活性炭,振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液。取10mL此氧化提取液,加入10mL硫脲溶液(20g/L),混匀,此试样为稀释液。

(3)显色反应

①于三个试管中各加入4mL氧化处理的稀释液,一个试管作为空白,在其余试管中加入1.OmL 2,4-二硝基苯肼溶液(20g/L)将所有试管放入(37±0.5)℃恒温箱或水浴中保温3h。

②3h后取出,除空白管外,将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷却至室温,然后加入1.OmL 2,4-二硝基苯肼溶液(20g/L),在室温中放置10~15min后放入冰水内。其余步骤同试样。

(4)85%硫酸处理:当试管放入冰水后,向每一试管中加入5mL 85%硫酸,滴加时间至少需要1min,需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出,在室温下放置30min后比色。

(5)比色:用1cm比色皿,以空白液调零点,于500nm波长测吸光值。

(6)标准曲线的绘制

①加2g活性炭于50mL标准溶液中,振摇1min,过滤。

②取10mL滤液放入500mL容量瓶中,加5.Og硫脲,用草酸溶液(10g/L)稀释至刻度,维生素C浓度20μg/mL。

③取5mL、10mL、20mL、25mL、40mL、50mL、60mL稀释液,分别放入7个100mL容量瓶中,用硫脲溶液(10g/L)稀释至刻度,使最后稀释液中维生素C的浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、5μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、12μg/mL。

④按试样测定步骤形成脎,并比色。

⑤吸光值为纵坐标,维生素C浓度(μg/mL)为横坐标,绘制标准曲线或求得回归方程。

5、计算

                 

式中:X——试样中总维生素C的含量,mg/100g;

c——由标准曲线查得或由回归方程算得的试样氧化液中总维生素C的浓度,μg/mL。

V——试样用10g/L草酸溶液定容的体积,mL;

F——试样氧化处理过程中的稀释倍数;

m——试样的质量,g。

计算结果表示到小数点后两位。

6、说明及注意事项

①本方法为GB/T 5009.86--2003标准第二法,第一法为荧光法。此外还有2,6-二氯靛酚滴定法、高效液相色谱法等。

②全部实验过程应避光进行操作。

③加入85%硫酸后试管从冰水中取出,溶液的颜色会继续变深,所以必须计算好,加入硫酸后准时0.5h比色。

④硫脲可防止维生素C被氧化,且可帮助脎的形成,最终溶液中硫脲的浓度均需一致,否则影响色度。

参考资料:食品检测技术


【关键词】维生素,食品检测,成分,检测,国家标准物质网 

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