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食品中毒鼠强的气相色谱-质谱分析测定(四)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-11-04

案例2:2004年某地一家人在吃水饺后发生“怪病”,并有一儿童死亡,受到多家媒体关注,现场流行病调查取样是在事件发生后的第2天,水饺、中毒患者呕吐物等已经没有,只采集到作为佐料食用的香油(样品1)、酱油(样品2)、醋(样品3)及中毒患者的血液(样品4)送实验室检验。

仪器与耗材:气相色谱-质谱仪,配有自动进样器和电子轰击源(EI);分析天平;离心机;涡旋混匀器;氮吹浓缩仪;超声波清洗器。

试剂与材料:所有试剂除另有说明外,均为分析纯,试验中所用水均为二次蒸馏水。丙酮(色谱纯);二氯甲烷(色谱纯);无水硫酸钠(分析纯):经5500C烘烤4h,储存于干燥器中,冷却后备用。

仪器条件:色谱柱,DB-5MS石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×O.25μm);色谱柱升温程序,初始温度500C,保持1min,以100C/min升温至250℃,保持10min;进样口温度2500C;载气,高纯氦气,恒流模式,流速为1.O mL/min;进样模式,不分流进样;进样体积1μL;电子轰击源(EI),能量70eV;离子源温度2300C;全扫描采集方式50~500amu;传输线温度2800C;溶剂延迟2min。

样品处理:取5mL香油(样品1),用50mL丙酮分次溶解并洗入100mL分液漏斗中,摇匀后加10mL水,轻轻旋转振摇1min,静置1h以上,弃去下面析出的油层,上层溶液自分液漏斗上口倒入另外一个250mL分液漏斗中,当心尽量不使剩余的油滴倒入,加20mL二氯甲烷、1O0mL硫酸钠溶液(50g/L),振摇1min,静置分层后,将二氯甲烷提取液移至50mL烧杯中,丙酮水溶液再用10mL二氯甲烷提取一次,合并提取液,以无水硫酸钠脱水至另外一个50mL烧杯中,氮吹至约O.5mL,转移至进样瓶中,待气相色谱一质谱分析。

分别取酱油(样品2)、醋(样品3)各10mL置于100mL分液漏斗中,分别以10mL 5mL二氯甲烷萃取两次,以无水硫酸钠脱水后,分别氮吹至0.5mL,转移至进样瓶中,待气相色谱-质谱分析。

血液样品(样品4)以3000r/min离心5min后,取上清液2mL,以5mL、3mL二氯甲烷提取两次,合并提取液,以无水硫酸钠脱水后,氮吹至O.2mL,转移至进样瓶衬管中,待气相色谱-质谱分析。

结果与讨论:①在香油(样品1)中检测出毒鼠强,在酱油(样品2)、醋(样品3)中均未检出毒鼠强,在中毒患者的血液(样品4)中检出毒鼠强。②香油样品不能直接用二氯甲烷液液萃取提取后测定,因为香油的成分主要是各种脂肪酸,脂肪酸易溶予二氯甲烷,对毒鼠强的测定造成很大干扰,通过与丙酮、水的反复萃取与反萃取,尽可能去除脂肪酸的干扰。③酱油、醋为直接用二氯甲烷液液萃取后测定,虽然其中的有机成分被萃取到二氯甲烷中,但是其数量及含量不大,不干扰毒鼠强的测定。④毒鼠强在人体内以原形存在,不与蛋白结合,在早先的方法学建立中发现毒鼠强主要在血清中,在血细胞中几乎检测不出。因此应在血液样品离心后,取上清液测定。⑤质量控制:在样品提取液进样前必须进二氯甲烷溶剂,以确认进样针和气相色谱一质谱仪器系统未受到污染;取20mL二氯甲烷氮吹至0.5mL,按照上述气相色谱一质谱条件进样1μL分析,总离子流图在毒鼠强保留时间处没有出现3倍噪音以上峰,以确保提取溶剂在浓缩时不会因溶剂中微量杂质浓缩而对毒鼠强产生干扰。样品的定性一是保留时间与毒鼠强标准的保留时间一致;二是样品中的毒鼠强的质谱图与毒鼠强标准的质谱图比对m/z 212是基峰、丰度为100%,m/z 240丰度是基峰的60%,允许偏差在士lO%内,m/z 132丰度是基峰的20%,允许偏差在±20%内,比例基本符合要求;三是样品中的毒鼠强的色谱峰形与毒鼠强标准的色谱峰形一致。

二、氟乙酰胺中毒样品的气相色谱-质谱分析测定

氟乙酰胺又名“敌蚜胺”“氟素儿”,为无色、无味,易溶于水的白色结晶,曾用作农业杀虫剂和灭鼠剂,因其有明显的二次药害,我国于20世纪70年代就禁止生产、销售和使用。但至今仍有不法商贩生产、销售以氟乙酰胺为主要成分的灭鼠药,造成多起严重中毒,甚至死亡事件,给人民造成巨大损失。

氟乙酰胺属高毒类农药,人口服中毒量估计为2~lOmg/kg,可引起神经系统、消化系统和肝脏损害,且可在体内蓄积。

氟乙酰胺经消化道吸收后在体内代谢,以有机氟和无机氟的形式随尿排出,尿氟排除量随中毒后时间延长而迅速下降。氟乙酰胺进入人体后,经脱胺生成氟乙酸,氟乙酸与草酰乙酸作用生成氟柠檬酸,氟柠檬酸抑制顺鸟头酸酶,破坏了三羟酸循环,使糖代谢发生障碍。此外,氟乙酸和氟柠檬酸对神经系统有直接刺激作用。对心脏亦有损伤作用。常见的中毒原因有:①误食用氟乙酰胺制作的毒饵;②误食因氟乙酰胺中毒死亡的动物;③自杀;④投毒而引起中毒。

氟乙酰胺中毒的临床表现:急性中毒的潜伏期与中毒原因,与侵入途径和摄入量亦有关,一般为10~15h,严重者可在O.5~1h内发病。

轻度中毒:头痛、头晕、视物模糊、黄视、乏力、倦怠,四肢发麻,面部和肢体小抽动。口渴、恶心、呕吐、上腹部有烧灼感、腹痛。窦性心动过速,体温下降。

中度中毒:除上述症状外,出现烦躁不安,肌肉颤动,肢体间歇性抽搐。呼吸道分泌物增多,有时溢出白色泡沫样分泌物,呼吸困难。轻度心肌损害和血压降低。

重度中毒:除上述症状外,尚可出现昏迷、谵妄、阵发性、强直性痉挛。严重心肌损害,心律失常、心室颤动、心力衰竭。大小便失常,呼吸衰竭。

中毒表现以神经系统为主者称为中枢型,在国内多见,主要表现为脑水肿、抽搐,是病情恶化的重要特征,也是中毒死亡的重要原因。

诊断依据:根据中毒患者误服含氟乙酰胺食物史、典型的临床表现,特别是反复发作的全身抽搐以及实验室检测中毒患者血氟、尿氟增高、呕吐物或食物等样品中测出氟乙酰胺等,可明确诊断。

治疗原则:①清除毒物:催吐、洗胃,洗胃液可用清水或1:5000高锰酸钾溶液。洗胃后可灌服牛奶、蛋清或氢氧化铝凝胶,以保护胃黏膜。②特效解毒剂:解氟灵(乙酰胺),其与氟乙酰胺代谢物氟乙酸有竞争作用,使三羟酸循环恢复,起到解毒作用。③对症治疗:控制抽搐十分重要,可选用地西泮、水合氯醛、冬眠合剂等。注意心、肾、肝、脑损伤,及时采取相应防治措施。

氟乙酰胺的测定没有国家标准方法,国家卫生与计划生育委员会在国卫办应急[2015]16号《急性有机氟杀鼠剂中毒事件医疗卫生应急救援技术方案》中提出有两种比色法可在没有气相色谱一质谱仪、液相色谱一质谱仪、离子色谱仪的实验室作为初步判断:①改良萘氏试剂法定性测定食品、生物样品中的氟乙酰胺;②异羟肟酸铁反应法测定食品等样品中的氟乙酰胺。以上方法可作为初步判断事件性质的参考,但不能作为确定事件性质的依据。

重大突发事件性质的判定,推荐采用其他分析方法加以确证:①全血中氟乙酸根离子液相色谱一质谱联用检测方法;②全血中氟乙酰胺的气相色谱一质谱检测方法;③全血中氟乙酸根离子的离子色谱检测方法;④生物样品中氟乙酸根离子的气相色谱和气相色谱-质谱联用检验方法。

参考资料:气相色谱-质谱在仪器安全监测中的应用

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【关键词】食品,毒鼠强,气相色谱-质谱,国家标准物质网 

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