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食品中氟乙酰胺的气相色谱-质谱分析测定
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-11-05

1、适用范围

适用于食品中氟乙酰胺的气相色谱-质谱定性定量分析。

2、原理

样品中的氟乙酰胺用乙酸乙酯提取,氮吹浓缩后,使用气相色谱-质谱仪进行选择离子监测,标准品对照,采用特征离子丰度比和保留时间定性,标准曲线外标法定量。

3、仪器与试剂

(1)仪器:气相色谱-质谱仪,配有自动进样器和电子轰击源(EI);涡旋混匀器;离心机;氮吹浓缩仪。

(2)试剂:所有试剂除另有说明外,均为分析纯,试验中所用水均为二次蒸馏水。乙酸乙酯(色谱纯),无水硫酸钠(分析纯):于550℃灼烧4h,冷却后贮于干燥器中备用。

(3)标准品:氟乙酰胺标准溶液(100μg/mL),用乙酸乙酯稀释配制成标准系列。

4、分析步骤

(1)样品处理。

①液体样品(水、稀饭、汤):样品如果浑浊,需要过滤或离心后,以乙酸乙酯液液萃取,萃取液以无水硫酸钠脱水后,提取液氮吹浓缩至0.5mL,转移至进样瓶中,进气相色谱-质谱联用仪分析。

②固体样品:加无水硫酸钠研磨至无结块后,加乙酸乙酯溶剂超声萃取,萃取液以无水硫酸钠脱水过滤后,提取液氮吹浓缩至O.5mL,转移至进样瓶中,进气相色谱-质谱联用仪分析。

③半固体样品:样品离心后,上清液用乙酸乙酯进行液液萃取,离心管底部样品按照固体样品操作,加无水硫酸钠研磨至元结块后,加乙酸乙酯溶剂超声萃取,合并提取液,以无水硫酸钠脱水后,氮吹浓缩至O.5mL,转移至进样瓶中,进气相色谱-质谱联用仪分析。

(2)样品检测。

①气相色谱参考条件:色谱柱,DB-5MS石英毛细管色谱柱或相当者(30m×O.25 mm×0.25μm);色谱柱升温程序,初始温度50℃,保持1min,以10℃/min升温至250℃,保持5min;进样口温度230℃;传输线温度250℃;载气,高纯氦气,恒流模式,流速为1.OmL/min;进样模式,不分流进样;进样体积1μL。

②质谱分析参考条件:离子源EI;离子源能量70eV;离子源温度230℃;扫描模式,选择离子模式;扫描离子m/z 44、m/z 77、m/z 33、m/g 78;溶剂延迟2min。

(3)样品定性检测。

①用5.Oμg/mL标准溶液,按上述仪器参考条件,进样检测后确定氟乙酰胺的保留时间,记录氟乙酰胺的特征离子丰度比,氟乙酰胺标准品的全扫描质谱图见图3—6。

②检测试剂空白、样品空白、容器空白和空白对照样品,确认无干扰。

③检测样品,将样品谱图与空白对照样品、标准谱图对比分析,以保留时间和特征离子定性。

④检测阳性对照(以空白对照样品加标为阳性对照品,加标量为每毫升样品测定液中含有10μg氟乙酰胺),确认阳性对照品能够检出。

(4)样品定量检测:标准品溶液购自公安部有关部门100μg/mL氟乙酰胺标准溶液,用乙酸乙酯稀释配制成标准系列O.1μg/mL、O.5μg/mL、1.Oμg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL,相同仪器条件进行气相色谱-质谱分析。

5、结果计算

以标准系列中氟乙酰胺m/z 44的峰面积对氟乙酰胺的质量浓度进行线性回归计算,按下式(3—1—3)计算样品中氟乙酰胺的含量:

                           (3-1-3)

式中:X——样品中氟乙酰胺含量,固体样品单位为mg/kg;液体样品单位为mg/L;

c——由工作站按标准系列外标法计算出的样品测定液中氟乙酰胺的质量浓度(μg/mL);

V——样品提取液最终定容体积(mL);

m——样品称取量,固体样品单位为g;液体样品单位为mL。

在突发食品中毒应急检测时,也可用外标一点法(直接比较法)定量,配制一个浓度为Cs的标准溶液,在同样分析操作条件下,分别取同样体积的标准溶液和样品测定溶液注入气相色谱-质谱仪,通过二者的定量离子碎片m/z 44的峰面积比计算出测定液中氟乙酰胺的浓度,由下式(3—1—4)计算样品中氟乙酰胺的含量X:

                              (3-1-4)

式中:X——样品中氟乙酰胺的含量,固体样品单位为mg/kg;液体样品单位为mg/L;

Cs——氟乙酰胺标准溶液的质量浓度(μg/mL);

Ai——测定液中氟乙酰胺定量离子碎片m/z 44的峰面积;

As——标准溶液氟乙酰胺定量离子碎片m/2 44中的峰面积;

V——样品提取液最终定容体积(mL);

m——样品称取量,固体样品单位为g;液体样品单位为mL。

6、质量控制

(1)在样品提取液进样前必须进乙酸乙酯溶剂,以确认进样针和气相色谱-质谱仪器系统未受到污染;取20mL乙酸乙酯氮吹至O.5mL,按照上述气相色谱一质谱条件进样1μL分析,总离子流图在氟乙酰胺保留时间处没有出现3倍噪音以上峰,以确保提取溶剂在浓缩时不会因溶剂中微量杂质浓缩而对氟乙酰胺测定产生干扰。

(2)检测过程应当采取控制措施,每个待测样品检测前必须进行试剂空白检测,以确认进样针和色谱-质谱仪器系统未受到污染。

案例3:2013年某地一名2岁儿童误服鼠药诱饵(家长将集市购买的“黑猫王”灭鼠药水倒在苹果皮上)发生中毒,因家长发现及时,立即到医院进行就医治疗,没有引起严重中毒症状,第二日患者家属将“黑猫王”灭鼠药水送实验室检验。

仪器与耗材:气相色谱-质谱仪,配有自动进样器和电子轰击源(EI);涡旋混匀器;氮吹浓缩仪;超声波清洗器。

试剂与材料:所有试剂除另有说明外,均为分析纯,试验中所用水均为二次蒸馏水;乙酸乙酯(色谱纯);无水硫酸钠(分析纯):经,550℃烘烤4h,储存于干燥器中,冷却后备用。

仪器条件:色谱柱,DB-5MS石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×O.25μm);色谱柱升温程序,初始温度500C,保持1min,以100C/min升温至2500C,保持10min;进样口温度230℃;载气,高纯氦气,恒流模式,流速为1.0 mL/min;进样模式,不分流进样;进样体积1μL;电子轰击源(EI),能量70eV;离子源温度230℃;全扫描采集方式40~400amu;传输线温度2500C;溶剂延迟2min。

样品处理:取样品O.2mL,以乙酸乙酯2mL提取一次,以无水硫酸钠脱水过滤后,待气相色谱-质谱分析。

结果与讨论:①氟乙酰胺标准的质谱图见图3—6,在样品中检测出氟乙酰胺,样品的总离子流图见图3—7,样品中氟乙酰胺的质谱图见图3—8;②取0.2mL样品加乙酸乙酯2mL后,没有出现分层,以约0.5g无水硫酸钠脱水后过滤后,直接进行气相色谱一质谱分析;③质量控制:在样品提取液进样前必须进乙酸乙酯溶剂,以确认进样针和气相色谱一质谱仪器系统未受到污染;取5mL乙酸乙酯氮吹至O.5mL,按照上述气相色谱一质谱条件进样1μL分析,总离子流图在氟乙酰胺保留时间处没有出现3倍噪音以上峰,以确保提取溶剂在浓缩时不会因溶剂中微量杂质浓缩而对氟乙酰胺产生干扰。样品的定性一是保留时间与氟乙酰胺标准的保留时间一致;二是样品的氟乙酰胺的质谱图与标准的质谱图比对m/z 44是基峰、丰度为100%,m/z 77丰度是基峰的60%,允许偏差在±10%内,m/z 33丰度是基峰的12%,允许偏差在±20%内,m/z 78丰度是基峰的5%,允许偏差在±50%内,比例符合要求;三是样品的氟乙酰胺的色谱峰形与标准的色谱峰形一致。

参考资料:气相色谱-质谱在仪器安全监测中的应用


【关键词】气相色谱-质谱,氟乙酰胺,国家标准物质网 

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