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原创:抗生素残留的检测方法(二)免疫检测法

发布时间:2020-01-02 10:22 作者:张紫楠
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免疫检测法(immunoassay,IA)是一种利用抗原-抗体特异性反应检测各种物质( 药物、激素、蛋白质、微生物等)的方法。IA 是近几十年发展起来的技术,主要包括放射免疫法、酶联免疫吸附法、荧光免疫测定法、固相免疫传感器、胶体金免疫层析技术、蛋白芯片等。目前研究应用较多的是酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金快速检测试纸条,该法比放射免疫法安全、方便,固相免疫传感器刚刚起步,有少量的文献报道。

一、酶联免疫吸附技术(ELISA):使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。ELISA检测方法特异性强,灵敏度高,对试剂的选择性高,很难同时分析多种成分,对结构类似的化合物有一定的交叉反应。

二、蛋白芯片法:又称蛋白质微阵列( protein microarray),是在基因芯片之后发展起来的。其原理是指采用原位合成或微量点样等方法,将多种不同的蛋白分子有序地固化于支持物(如玻片、膜、孔板等载体)的表面,组成密集二维分子阵列,然后与待测生物样品中的靶分子结合,通过特定的仪器,比如平板扫描仪、激光共聚焦扫描仪等对芯片信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析,从而判断样品中靶分子的数量或含量。目前蛋白芯片常用的检测方法为标记检测法,通常使用纳米材料,荧光、酶等物质标记,通过相应的仪器( 平板扫描仪或激光共聚焦芯片扫描仪等)对信号进行检测,从而获得检测结果。荧光标记检测法因其灵敏度高,已成为目前使用最多的一种标记方法。但需注意的是荧光素的易淬灭和易漂白性。商品化的荧光检测设备己经相当成熟,所以市场上开发的蛋白质芯片产品大部分以荧光为标记物。

蛋白芯片法与传统ELISA方法比较,具有高通量,样品用量少,一份样品可同时进行多指标分析,大大降低了检测成本,提高了检测效率,并且检测限与灵敏度等均与ELISA方法相当。因此蛋白芯片法逐渐成为免疫分析方法的发展方向之一,受到越来越广泛的重视。
 

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