高效液相色谱法测定水中联苯胺（一）

本文建立了高效液相色谱(荧光检测器FLD)测定水中联苯胺的分析方法。水样中的联苯胺被C18固相萃取柱吸附后用乙酸溶液将联苯胺保留在吸附柱内,用甲醇溶液淋洗去除杂质,再用氨水甲醇混合溶液进行洗脱,最后用氮吹仪浓缩定容,用液相色谱荧光检测器进行定量测定。在添加浓度为10.0ug/L和100.0ug/L的条件下,加标回收率在94.1%～110%之间,相对标准偏差在2.38%～4.05%之间,方法检出限为0.004ug/L。本方法操作简便快捷,杂质引入少,应用范围广,地表水、地下水、生活污水和工业废水中的联苯胺均可用该方法测定。

联苯胺是印染、油漆、塑料等工业生产中的常用原材料，能严重危害人体健康，可经呼吸道、皮肤等进入人体，对人体的血液系统、肝脏和神经系统等造成严重损伤。目前，联苯胺已被国际癌症研究机构列为第一类致癌物。水中联苯胺的分析方法国内外目前主要有分光光度法、荧光光度法、气相色谱法、气相色谱-质谱仪联用法、液相色谱法、液相色谱-质谱仪联用法等。分光光度法和荧光光度法只能测定总量，无法对单一组分进行定性和定量分析；气相色谱法和气相色谱-质谱仪联用法需用液液萃取等方式对水样进行浓缩富集后再测定，前处理时间较长且容易带入有机杂质的干扰，并且气相色谱-质谱仪联用法咋使用过程中产生的费用较高，相比较而言，液相色谱法前处理采用固相萃取法将富集和净化两个步骤同时进行，操作速度快，有机溶剂用量少，杂质干扰也少，更加符合实验室得要求。

本文利用C18固相萃取柱对水中联苯胺进行富集和净化，再用氨水甲醇混合溶液洗脱，定容后用高效液相色谱荧光检测器进行测定，前处理较简单，无需复杂操作且灵敏度高，检出限低，适合大部分实验室的需求。

试剂材料与方法

试剂材料

甲醇中的联苯胺标准溶液（北京迪科马科技有限公司，浓度1004ug/m L）、乙腈（液相色谱纯，ASTOON CHEMICAL TECHNOLOGY.INC）、甲醇（液相色谱纯，ASTOON CHEMICAL TECHNOLOGY.INC）、冰醋酸（分析纯，西陇化工股份有限公司）、氨水（分析纯，广东光华科技股份有限公司）、固相萃取柱（Lab Tech C18小柱，1000mg/6ml）。

联苯胺中间溶液的配置：准确移取联苯胺标准溶液10.00ul于2ml的棕色安培瓶中，用甲醇定容至1.00ml，得到浓度为100.4mg/L的标准中间液，再准确移取联苯胺中间液100.0ml于2ml的棕色安培瓶中，用甲醇定容至1.00ml，得到浓度为1.004mg/L的标准使用液，备用。

仪器和设备

高效液相色谱仪（安捷伦LC1260，具有荧光检测器（FLD））、自动进样器1260 ALS、色谱柱（HPLC C18毛细管色谱柱）、氮吹仪（Lab Tech）、超声波清洗仪器（KWS-1012F，深圳市科威信洗净科技有限公司）、微量注射器（10.0、50.0、100、1000ul）、一般实验室常用仪器和设备。

样品前处理过程

样品采集

根据相关规定的要求进行样品采集。在采样前，向棕色样品瓶中加入硫代硫酸钠溶液（每500ml加入40mg）固定，采样时，水样应充满容器并溢出。采样后保证样品的p H值在6-9，若p H值不在6-9之间，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节至6-9。样品采集后应在4℃冷藏，避光保存，5d内萃取，萃取液在4℃避光保存，4d内完成分析。

样品的前处理

先用5ml甲醇以2ml/min的流速通过C18固相萃取柱，进行萃取柱活化，活化完成后，将150ml的水样以约2ml/min的流速通过已活化的固相萃取柱，待水中的联苯胺被萃取柱富集后，再依次用5ml乙酸和8ml甲醇溶液淋洗萃取柱以去除柱中残留的杂质，最后用7ml氨水-甲醇混合溶液将萃取柱中的联苯胺洗脱下来，洗脱液在60℃浓缩，定容至2ml，过0.45um滤膜后冷藏保存，待测。

空白溶液

用去离子水或蒸馏水代替样品，按照与样品一致的处理方法进行空白溶液的制备。

色谱条件

流动相为乙腈和水溶液；洗脱程序为等度淋洗；流动相比例为乙腈/水（v/v)=60/40；柱温40℃；流速为1.0ml/min；进样量为40.0ul；检测器波长为激发波长292nm，检测波长395nm；检测器为荧光检测器。

标准溶液的配置

取适量的已配置好的联苯胺标准使用液，用甲醇溶液稀释，制备成浓度分别为5.00ug/L、10.0ug/L、20.0ug/L、50.0ug/L、100ug/L、200ug/L的标准曲线系列，备用。

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