志贺氏菌参考检验方法（一）

一、志贺氏菌属各菌型与生化型鉴别

志贺氏菌属的各个菌，除各自具有能识别的抗原成分外，还具有一些不同的生化学特征，有一定的鉴别意义，可供菌型鉴定时的参考。

二、制法

(一)缓冲蛋白胨水

成分：蛋白胨10g，氯化钠5g，磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂0)9g，磷酸二氢钾1.5g，蒸馏水1000mL，PH7.2。

按上述成分配好后，装入大烧瓶，121⁰C高压灭菌，临用时无菌分装每瓶225mL，供沙门氏菌前增菌用。

(二)氯化镁孔雀绿(MM)增菌液

成分：甲液：胰蛋白胨5g，氯化钠8g，磷酸二氢钾1.6g，蒸馏水1000mL。

乙液：氯化镁(化学纯)40g，蒸馏水100mL，丙液：O.4%孔雀绿水溶液。

制法：分别按上述成分配好，121⁰C高压灭菌15min备用，临用时取甲液90mL，乙液9mL，丙液0.9mL，以无菌操作混合即可。

(三)四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液

成分：多胨或所胨5g，胆盐lg，碳酸钙10g，硫代硫酸钠30g，蒸馏水1000mL。

制法：将上述各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶：100mL中加入碘溶液2mL，0．1％煌绿溶液1mL。

碘溶液配制：碘6g，碘化钾5g，蒸馏水20mL。

(四)亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液

成分：蛋白胨5g，乳糖4g，亚硒酸氢钠4g，磷酸氢二钠5.5g，磷酸二氢钾4.5g，L-胱氨酸O.01g，蒸馏水1000mL。

制法：将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，俟冷备用，另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，俟冷，以无菌操作与上液混合。再加入1％L-胱氨酸-氢氧化钠溶液：1mL。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL，pH应为7.O±O.1。

1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法：称取L-胱氨酸O.1g(或DL-胱氨酸O.2g)，加1N氢氧化钠1.5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。

(五)亚硫酸铋琼脂(BS)

成分：蛋白胨10g，

牛肉膏5g，葡萄糖5g，硫酸亚铁O.3g，磷酸氢二钠4g，煌绿O.025g，柠檬酸铋铵2g，亚硫酸钠6g，琼脂18-20g，蒸馏水1000mL，pH7.5。

制法：将前5种成分溶解于300mL蒸馏水中，将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解，将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃，将以上三液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加O.5％煌绿水溶液5mL摇匀，冷至50～55℃倾注平板。

注：此培养基不需高压灭菌，制备过程中不宜过分加热，以免降低其选择性，应在临用前一天制备，贮存于室温暗处，超过48h，不宜使用。

(六)DHL琼脂(Deoxycholate Hydrogen Sulfide Laetose Agar)

成分：蛋白胨20g

牛肉膏3g，乳糖lOg，蔗糖10g，去氧胆酸钠1g，硫代硫酸钠2.3g，柠檬酸钠1g，柠檬酸铁铵1g，中性红0.03g，琼脂18～20g，蒸馏水1000mL。

制法：除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中，校正pH为7.3，再将琼脂于600 mL蒸馏水中煮沸溶解，两液合并，加入0.5%中性红水溶液6mL，待冷至50-55⁰C倾注平板。

(七)HE琼脂(Hektoen Enteric Agar)

成分：脉胨12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆盐20g，氯化钠5g，琼脂18～20g，蒸馏水1000mL，0.4％溴麝香草酚蓝溶液16mL，Andrade指示剂20mL，甲液20mL，乙液20mL，PH7.5。

制法：将前7种成分溶解于400mL蒸馏水内为基础液，将琼脂加入于600 mL蒸馏水内，加热溶解，加入甲液和乙液于基础液内，校正pH，再加入指示剂，并与琼脂合并，待冷至50-55⁰C倾注平板。

注：①此培养基不可高压灭菌。

②甲液的配制：

硫代硫酸钠34g，柠檬酸铁铵4g，蒸馏水100mL。

③乙液的配制：

去氧胆酸钠lOg，蒸馏水100mL。

④Andrade指示剂：

酸性复红0.5g，1N氢氧化钠溶液16mL，蒸馏水lOOmL。

将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2 mL。

参考资料：食品卫生微生物检验标准手册

相关链接：磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，碘，葡萄糖