硒元素形态分析样品前处理技术

元素形态分析的样品前处理不同于传统的总量分析，在前处理方法上需要保持元素的现有形态，因此也不能沿用传统的用于总量分析的酸消解方法和灰化法。元素形态分析的样品前处理一般分以下几个步骤：

① 样品制备及试样的储存；

② 目标分析物的选择性提取；

③ 必要时，形态分离前的衍生化。

1. 富硒大蒜中硒的形态分析（γ-Glu-MeSeCys、MeSeCys、SeMet、Se(VI)）

（1）水溶液萃取

精确称取干燥的大蒜样品0.2g于带有塞子的聚乙烯瓶中，加入10mL盐酸羟胺溶液。新鲜的大蒜拨皮，称取大约20g蒜瓣，直接加入200mL同样的溶液，均一化样品。样品放入37℃水浴中，磁力搅拌1小时。离心后过滤。

（2）酶萃取

精确称取0.2g干燥的大蒜样品于带有塞子的玻璃管中，加入10mL水和20mg蛋白酶，在37℃条件下磁力搅拌24小时。样品离心后经0.45μm滤膜过滤。

注：酶萃取效率几乎是100%，水溶液萃取的应用主要是查找易发生变化的selenoamino acids。

2. 天然蘑菇与富硒蘑菇中硒的形态分析(SeMet和未知硒形态)

(1) 水萃取（37℃或85℃）：

精确称取0.2g冻干样品，加入5mL Milli-Q水，样品置于浸没式数字控制自动调温器中，在相应温度下加热1h。

(2) 蛋白酶水解

精确称取0.2g冻干的蘑菇样品，加入20mg蛋白酶和5g Milli-Q水，在37℃条件下反应16h。萃取完后，离心，经0.45μm的滤膜过滤。

注：天然蘑菇采用水萃取程序和蛋白酶水解程序，萃取效率相差不多。富硒蘑菇采用蛋白酶水解程序，萃取效率比水萃取程序高。

3. 牡蛎组织样品中硒的形态分析(Se(IV)、SeCys2、TMSe+、SeMet、Se(VI))

称取0.25g冻干的牡蛎组织样品，加入10%(w/w)非特征性枯草杆菌蛋白酶，在pH 7.50，37℃条件下，反应24h，重复上述步骤2次，合并反应液，经10kDa定点过滤器超过滤。

4. 环境样品中硒的形态分析（有机硒）

以甲醇/水(1：1，v/v)或甲醇/水(1：1，v/v)-0.28mol/L HCl或甲醇/水(1：1，v/v)-4%NH3.H2O为提取液，置于盛有一定量试样的刻度管中，超声30min后离心，收集上层清液，重复上述过程1次，合并上清液，经0.45μm滤膜过滤，调节pH为7.0左右后测定。

对于非固体环境样品，如尿样，用水精确稀释（1+4）后直接测定。

5. 沉积物中硒的形态分析（Se(IV)、Se(VI)）

精确称取一定量样品于聚苯乙烯离心管中，加入2mol/L氢氧化钠溶液，超声4h，离心，经0.45μm滤膜过滤，调节pH为7.0左右后测定。

6.亚硒酵母片中硒的形态分析（SeCys、Se(IV)、SeMet、SeMeCys）

精确称取1.0g样品于50mL离心管中，加入25mL去离子水，离心管放于沸水浴中加热1h，混合物每15min摇匀1次，萃取完毕，样品离心，经0.22μm尼龙过滤器过滤。

7. 发酵粉和米粉中硒的形态分析(SeCys、SeMet、SeMeCys、Se(IV)、Se(VI))

精确称取0.4g米粉，加入40mg蛋白酶，20mg脂肪酶和5g Milli-Q水，在37℃条件下反应16h。水解后的样品离心（4000g,45min,15℃），过滤。对于发酵粉，样品量和各种酶的用量都减半。

8.尿样中硒的形态分析（SeCys、Se(IV)、SeMet、SeMeCys）

精确量取10mL尿样，加入2mL 3%乙酸，摇5min，用去离子水稀释至25mL。样品离心后经0.22μm尼龙过滤器过滤。

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