建立完善的临床检验量值溯源体系，首先要建立参考(标准)系统(包括参考测定程序和标准物质)。制备不同级别的标准物质是实现实验室间结果互认的基础，尤其是纯度标准物质作为量值溯源的源头，在量值传递过程中发挥着举足轻重的作用。国际上已经有相应的胆固醇纯度标准物质和血清标准物质。国内也有相应的标准物质(胆固醇纯度标准物质GBW09203b和甘油标准物质GBW09149)、血清标物等。由于胆固醇不溶于水，在参考方法或常规测定中，通常将胆固醇溶于甲醇或乙醇中，以用作校准物或质控物，由于甲醇或乙醇挥发性较大，体积随温度变化较大，且基质同实际临床样本差距较大，容易引起测定结果的偏差。甘油极易溶于水，通常直接配制水溶液。目前尚没有商品化的含胆固醇和甘油两种项目的水溶液。本研究按照ISOGuide35和国家一级标准物质技术规范(JJG1006．1994)的要求，以水溶液作为基质，配制了6个浓度水平的标准溶液，包含胆固醇和甘油两个项目，分别称为RM1～RM6。本标准物质主要用于参考系统的校准或准确性评定，也可用于具有互通性的常规系统中。

材料与方法

一、实验材料

胆固醇纯度标准物质GBW09203b(白色粉末，卫生部北京老年医学研究所和国家标准物质研究中心，纯度99．7％，不确定度0．1％)。甘油标准物质GBW09149(卫生部北京老年医学研究所，定值0．1036±0．0004g／g)，此物质为纯度99．9％的甘油(Sigma公司，G-7893，Lot96H0568)的水溶液，经滴定法定值。叠氮钠为白色粉末，纯度大于等于99．5％，Sigma公司产品。甲基．B．环糊精购自淄博千汇生物科技有限公司，纯度大于等于98％。

二、标准物质的制备

1．胆固醇标准物质的干燥：GBW09203b放人玻璃平皿中铺开，真空干燥箱50℃减压干燥10h。

2．0．05％叠氮钠的配制：称取1g叠氮钠加去离子水至2L，混匀，得到浓度为0．05％的叠氮钠溶液。

3．20％甲基．B．环糊精(MBCD)水溶液的配制：称取400gMBCD加人到2L容量瓶中，加入1000g含0．05％的叠氮钠溶液，搅拌均匀后再加入600g0．05％叠氮钠溶液，使MBCD的终浓度约为20％(g／g)，混匀后经0．45Ixm滤膜过滤，收取滤液作为所配制标准物质的溶剂。配制之前进行色谱质谱分析，检测不到胆固醇和甘油方可使用。

4．胆固醇和甘油环糊精标准溶液的配制：配制6个浓度水平的胆固醇和甘油标准溶液，其对应的胆固醇浓度分别为25、50、100、200、300、400mg／dl(换算物质的量浓度为0．647、1．293、2．586、5．172、7．758和10．344mmol／L)，甘油浓度分别为25、50、100、200、300、400mg／dl(浓度约为0．282、0．565、1．129、2．259、3．388和4．517mmol／L)。每个水平250ml，分别命名为RM1一RM6。准确称取约60．6、123、235、475、720和950mg的胆固醇标准物质GBW09203b和甘油标准物质GBW09149置于可密封的250ml具盖容器中，分别向各容器中加入20％的MBCD滤液250g。标准物质用十万分之一天平称量，MBCD溶液用千分之一天平称量。记录加入的GBW09203b、GBW09149和MBCD溶液的准确质量。

5．混合、分装、保存：将各配制好的标准溶液放置于混匀器上混匀后，按0．8mV支分装至2ml玻璃容器中，RM1～RM6各分装270支玻璃安瓿。一70℃保存。

三、均匀性和稳定性检验

1．实验设计：按GB／T15000．3-2008／ISOGuide35：2006(标准物质／标准样品定值的一般原则和统计方法》和国家一级标准物质技术规范要求进行均匀性和稳定性检验的设计和实验。本项目随机抽取一70℃保存的RM1～RM6各12瓶进行均匀性检验。采用同步稳定性研究|4进行稳定性检验，共设计13种“温时”，以液氮(一196oC)作为参比温度和0时间点，一70℃和一20℃储存3、6、12个月，4℃储存0．5、1、2个月，25cI=储存0．25、0．5、1个月与0点比较。储存于不同温度和不同时间的样品在到期时抽取3瓶转移至液氮中，一20℃、4℃和25℃放置的样品先在一70℃冰箱放置过夜再转至液氮中。至稳定性试验12个月结束时将前述所有样品同时从液氮中一并取出，融化、混匀后同时分析所有样本。

2．仪器和试剂：采用日立7180全自动生化分析仪和罗氏试剂及配套校准品和质控品组成的测定系统进行分析。使用罗氏厂家推荐的分析参数。胆固醇和甘油的测定原理分别为胆固醇氧化酶法和GPO—POD法。

3．实验方法：进行均匀性、稳定性分析，将均匀性测定结果采用单因素方差分析进行检验，将各温时下稳定性测定结果与时间进行线性回归分析和趋势性检验，检验回归系数的显著性，以P>0．05认为不具有显著性，即可认为稳定。评估不均匀性和不稳定性带来的不确定度。