喹诺酮类药物的危害及检测目的

喹诺酮类药物主要通过阻断DNA回旋酶，造成细菌DNA不可逆损害来达到抗菌效果，它们具有抗菌、抗支原体、抗球虫等作用。因喹诺酮类药物对多种革兰氏阴性菌具有良好的杀菌作用，且价格低廉，是养殖中常用到的三大类药物之一，主要用于预防和治疗畜禽及鱼类的感染性病状。食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量（GB 31650-2019）中规定允许使用的喹诺酮类药物包括：达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、氟甲喹、恶喹酸、沙拉沙星。虽然允许使用，但是也要规范用药，严格把控药物使用剂量、休药时间、用药对象等方面内容。因为如果喹诺酮类药物残留通过食物进入人体，会造成人类中毒、过敏，甚至致癌、致畸、致突变等严重后果，给消费者的健康带来潜在危害。

本文阐述了如何将喹诺酮类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据国标GB/T 21312-2007，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：喹诺酮类药物

应用范围：食品/动物源性食品/猪肉、猪肝、猪肾、牛奶、鸡蛋等

方法原理：用0.1mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲液（pH 4.0）提取样品中的喹诺酮类抗生素，经过滤和离心后，上清液经HLB固相萃取柱净化。高效液相色谱-质谱/质谱测定，用阴性样品基质加标外标法定量。

前处理仪器：电子天平：感量0.0001 g和0.01 g；组织匀浆机；旋涡混合器；冷冻离心机（最高转速大于10000 r/min）；聚丙烯离心管（50 mL）；酸度计（0.01）；氮吹仪；固相萃取仪

检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

试样制备

1.动物肌肉和动物内脏

将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室，在-10℃以下保存，一周内进行处理。取适量新鲜或冷冻解冻的动物组织样品去筋、捣碎均匀。

2.牛奶

将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室，在-10℃以下保存，一周内进行处理。取适量新鲜或冷冻解冻的样品混合均匀。

3.鸡蛋

将现场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室，在-10℃以下保存，一周内进行处理。取适量新鲜的样品，去壳后混合均匀。

前处理方法

1.提取

动物肌肉组织、肝脏、肾脏

称取均质试样5.0 g（精确到0.1 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，加入20 mL 0.1 mol/LEDTA-Mcllvaine缓冲溶液，1000 r/min旋涡混合1 min，超声提取10 min，10000r/min离心5 min（温度低于5℃），提取三次，合并上清液。

牛奶和鸡蛋

称取均质试样5.0 g（精确到0.01 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，加入40 mL 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液溶解，1000 r/min旋涡混合1 min，超声提取10 min，10000r/min离心10min（温度低于5℃），取上清液。

2.净化

HLB固相萃取柱（200 mg, 6 mL），使用时用6 mL甲醇洗涤、6 mL水活化。将提取液以2 mL/min ~ 3 mL/min的速度过柱，弃去滤液，用2mL 5%甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，再用6 mL甲醇洗脱并收集洗脱液。洗脱液用氮气吹干，用1 mL 0.2%甲酸水溶液溶解，1000 r/min旋涡混合1 min，用于上机检测。

注意事项

1.浓度为1 mg/mL的喹诺酮标准物质储备液可在-20℃冰箱中避光保存3个月。

2.该国标方法采用三次提取肉类样品沉淀物的方式提高回收率。

3.在固相萃取净化过程中，淋洗后一定挤干小柱，防止洗脱时水进入洗脱液，导致浓缩过程中氮气吹不干洗脱液，影响定量的准确性。

4.由于该国标方法没有使用同位素内标来校正回收率，建议使用相应的空白样品基质提取液配制标准曲线。还可以购置相对应的同位素内标，配合液质仪检测使用。

5.配制EDTA-Mcllvaine缓冲溶液时，建议配合使用磁力搅拌器，省时省力，使乙二胺四乙酸二钠完全溶解。

6.定容液涡旋混合复溶，有需要时可以超声30 s，提高复溶效率。

7.由于喹诺酮类药物种类多，个别药物中文名称比较多（一药多名），现将国标中的标准物质中文别名总结如下表，以方便检测人员配制标准溶液。

参考文献

GB/T 21312-2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法