一、试剂配制

缓冲液：将一包缓冲剂倒入510ml蒸馏水中搅拌溶解。

酶：倒入10ml缓冲液至瓶中，摇匀溶解。

显色剂：倒入10ml缓冲液至瓶中，摇匀溶解。

底物：加入10ml蒸馏水至瓶中，摇匀溶解。

试剂配制好后放入冰箱冷藏，保质期为3个月。

二、仪器预热及空白对照。

提前将仪器开机预热，此过程一般10分钟。登陆账号和密码均为000000。预热结束后点空白对照，观察每个通道显示的光强度，在10000-40000则光源正常。

三、样品制备、提取

1、将样品剪至1cm左右大小，称取2g样品至样品瓶中。块茎类称4g。

2、加入10ml缓冲液振荡1-2分钟，放置10-15分钟备用。若液体浑浊

或杂质较多，则过滤后备用。

三、加试剂

1、每个样品提取液分别吸取2.5ml至刻度试管中，另取一只试管加入2.5ml缓冲液代替样品作为空白对照。

2、加入100ul酶、100ul显色剂到各试管中，混匀反应15分钟。若室温低于25℃，需37℃水浴下反应。

3、加入100ul底物至各试管中，摇匀。

四、上机比色

1、将试管中液体倒入比色皿，放入速测仪检测通道。第一通道放入空白对照，其余通道放入样品溶液。（毛玻璃面对准自己。）

2、关上盖子，点击“试剂对照”--开始，等待3分钟即可。

五、结果

1、通过数据管理可查看和打印结果。

2、若抑制率大于50%，则结果判定为阳性。出现阳性时需复测1-2次，若仍为阳性，方可下结论。

六、注意

1、葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。

2、对一些含叶绿素较高的蔬菜（缓冲液浸提后，明显颜色较深的样品），也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。