N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸，简称HEPES，是一种Good’s缓冲剂，pH缓冲范围为6.8-8.2。HEPES易溶于水，难溶于其它溶剂，与多价金属离子不发生沉淀反应，解离作用极少受其浓度、温度、离子组成或培养基盐分的影响。下面具体介绍一种制备HEPES缓冲剂的方法[1]。

一、合成路线

二、合成步骤

（1）化合物1的合成

以六水哌嗪为原料，溶于乙醇形成物色透明溶液，在80°C保温条件下，一边回流一边加入环氧乙烷。反应结束后，减压蒸馏除去乙醇，用真空分馏法分离提纯残留物，收集沸程125°C -127°C的馏出物，即为化合物1。

（2）化合物2的合成

首先在烧瓶中加入无水亚硫酸钠和水，外用水浴加热，当反应液达90°C时，维持此温度，滴加1,2-二氯乙 烷，完毕后继续回流。然后将反应液在70°C水浴中减压浓缩至白色固体全部析出，再将此固体悬浮于95%的乙醇中，加热回流，趁热滤去不溶物。清液在0°C放置过夜。次日，用布氏漏斗抽滤收集白色片状结晶。

（3）HEPES的合成

在烧瓶中放入化合物1，2和水，搅拌成无色透明清液（pH>13），外用110°C -115°C油浴保温。启动搅拌器，反应20分钟后，反应液pH逐渐下降为9，滴加5N氢氧化钠，维持反应液pH值在9-10之间。待反应液pH不在下降，停加氢氧化钠，继续回流至反应结束。然后用水稀释冷却的反应液，用离子交换树脂[H⁺]^*层析柱去盐纯化。层析得到的收集液减压浓缩，用活性炭脱色过滤。将无色透明清液继续浓缩至厚糖浆状，趁热倒入沸腾的95%乙醇中，用冰醋酸调节pH到5，立即加入无水乙醇，析出白色晶体，室温自然冷却，0°C放置过夜。次日，用布氏漏斗抽滤收集结晶，并用冰冷无水乙醇洗涤。将洗涤后的晶体悬浮于95%乙醇中，加热至75°C，滴加水，使之全溶。趁热过滤，清液加无水乙醇，在摇动下自然冷却，使白色结晶呈疏松状慢慢析出。0°C放置过夜。次日，用布氏漏斗抽滤收集结晶，并用冰冷无水乙醇洗涤，80°C烘箱烘干即得到产物。