北方伟业计量集团有限公司
判断数据的有效性，可以结合扩增曲线，溶解曲线，标准曲线以及NTC（检验引物）和NRC（检验模板）来分析。
1.扩增曲线应呈现出平滑的S型曲线，起始无扩增，起峰时间正常，由扩增曲线得到的Ct值是判断实验成功与否的重要参考，Ct值有一定的可信范围，临床检验小于33，科学研究小于38，内参基因一般小于20，且样品间内参的Ct值差不超过1，表明内参基因表达量稳定，复孔Ct值标准偏差不超过0.5；
2.溶解曲线应呈现单峰，峰的宽度较小，NTC和NRC无特异的峰出现；
3.标准曲线的斜率范围-3.58~-3.10，对应引物的扩增效率范围90%~110%，R2代表线性拟合度，一般大于0.95；
4.NTC用于判断反应是否存在模板污染，引物是否特异，是否会形成引物二聚体。NTC最佳状况是没有扩增，即扩增曲线和溶5.解曲线与基线重合，没有Ct值。NTC有扩增的情况下，至少与加入模板体系的Ct值相差5或10以上；
6.NRC用于判断cDNA模板中是否存在基因组DNA残留，可以间接反映RNA中基因组DNA污染情况，理想情况下，NRC没有Ct值，有Ct值的话至少要跟加入cDNA模板体系的Ct值相差5或10以上。
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