蛋白质检测注意事项

Daily007 2020-08-04 12:53 评论( 0 ) 浏览( 1563 )

蛋白质检测注意事项

1、样品应是均匀的，若是固体样品应事先研细过筛，液体样要混合均匀。

2、样品放入凯氏烧瓶时，不要黏附瓶颈上，万一黏附可用少量水缓慢冲下，以免被检样消化不完全，使结果偏低。

3、使用自动凯氏定氮仪在检测样品前需做空白试验对照。

4、有机物分解需要H₂SO₄量，H₂SO₄应根据有机物种类不同而加的量就不同，如果试样含脂类高，则加H₂SO₄多，为了提高分解温度，要大量添加K₂SO₄，但不能太多，也不能太少，太少则氨化不充分。K₂SO₄和H₂SO₄的添加比例是：

1g样品K₂SO₄：H₂SO₄=7g：12ml，这种比例在国内外都使用，是公认的，还有一种比例：K₂SO₄：H₂SO₄=10 g：20ml。

5、对于蛋白质含量较高或者含量特别低的样品需要适当减少或增加称样量，以免造成误差。

6、在整个消化过程中，不要用强火，保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏烧瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。对于水分或者脂肪含量较高的样品，消化温度宜逐渐增加。如果直接增加至420℃容易造成样品飞溅至消化管壁从而导致消化不完全，使实际检测结果偏低。

7、如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这时会形成硫酸氢钾，而不与氨作用，因此当硫酸过多底物被消耗掉或样品中脂肪含量过高时，要添加硫酸量。

8、消化剂绿色后继续消化30分钟即可。

9、混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色，如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。

10、自动凯氏定氮仪属贵重仪器，操作完成后及时做好清洗工作并定期保养。

11、向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀。这时由于分解促进剂与加入的硫酸铜反应，生成氢氧化铜，经加热后又分解生成氧化铜的沉淀，有时Cu离子与氨作用生成深兰色的络合物。

12、浓硫酸属强酸且腐蚀性较强，在操作过程中需注意安全，充分做好自我保护措施。如防毒面具、手套、护目镜等。

13、目前都用硼酸吸收液，用硼酸代替H₂SO₄，这样可省略了反滴定，H₂SO₄是强酸，要求较严，而硼酸是弱酸，在滴定时，不影响指示剂变色范围，另外硼酸为吸收液浓度在2%即可将氨完全吸收。

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