1.以无菌操作方式开启冻干菌种管，加入适量培养液（按菌种选择培养液，如细菌选择营养肉汤、白色念珠菌选择沙堡液体培养基、分枝杆菌选择苏通综合液体培养基、黑曲霉菌选择麦芽浸膏营养肉汤培养基），吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0 mL～10.0 mL相应培养液的试管，滴入少许菌种悬液，在适宜温度下培养至规定时间（一般为36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h、黑曲霉菌为30 ℃± 1℃培养42 h～48 h），此为第1代培养物。

2.用接种环取第1代培养物，或从菌种冻存管中取适量菌液/瓷珠，划线接种于相应培养基平板（按菌种选择培养基，如细菌选择营养琼脂培养基、白色念珠菌选择沙堡琼脂培养基、分枝杆菌选择改良罗氏培养基或其他商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基、黑曲霉菌选择麦芽浸膏琼脂培养基），在适宜温度下培养至规定时间（一般为36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h、分枝杆菌36 ℃± 1℃培养72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培养42 h～48 h），此为第2代培养物。

3.挑取第2代培养物中典型菌落，接种于相应培养基斜面或平板（按菌种选择培养基斜面，如细菌选择营养琼脂斜面、白色念珠菌选择沙堡琼脂斜面、分枝杆菌选择改良罗氏培养基或其他商品化分枝杆菌专用复合琼脂斜面、黑曲霉菌选择麦芽浸膏琼脂培养基平板），在适宜温度下培养至规定时间（一般为36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h、分枝杆菌36 ℃±1 ℃培养72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培养42 h～48 h），此为第3代培养物。

4.取第3代培养物，接种于相应培养基斜面，在适宜温度下培养至规定时间，此为第4代培养物。5.1.5 按上述方法培养至所需代数，传代时在试管上注明菌种名称、菌种号、代数及传代日期等基本信息。