玉屏风散出自宋代张松的《究原方》，由黄芪、白术和防风组成，具有益气固表止汗的功效，可以治疗中医学的各种汗证虚症，为中医“扶正固本”的经典名方。现代药理研究表明玉屏风散还具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等方面的功能。

复方配伍是中医用药最重要的特点之一，复方质量稳定是药物剂量准确的基础和前提。目前市面上中药饮片的来源渠道多、范围广，市售饮片对方剂质量一致性的影响值得探讨。指纹图谱是中药一致性评价、复方解析和研究的主要手段之一，已用于玉屏风散的质量评价。文献报道的玉屏风散水

煎液高效液相色谱指纹图谱因流动相梯度洗脱条件不理想而分离效果欠佳。

笔者以乙腈 –0.05%磷酸水为流动相，优化洗脱条件，对市售药材饮片制备的玉屏风散进行色谱分析，利用高效液相色谱指纹图谱技术，从全化学成分的角度探讨市售饮片对该方剂组成一致性的影响，为玉屏风散的质量控制和评价提供依据。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：1260 型，配置四元泵、全自动进样器、DAD二极管阵列检测器、高效液相色谱工作站，美国安捷伦科技有限公司；

旋转蒸发仪：EYELA OSB–2100型，日本东京理化器械株式会社；

台式离心机：Heraeus Biofuge Primo R 型，美国赛默飞世尔科技有限公司；

中药指纹图谱相似度评价系统软件：2004A，国家药典委员会；

乙腈：色谱纯，美国费希尔公司；

甲醇：色谱纯，山东禹王和天下新材料有限公司；毛 蕊 异 黄 酮 苷（M–020–170926）、升 麻 素 苷（S–004–170827）、 升 麻 素（S–007–170429）、5-O-甲 基 维 斯 阿 米 醇 苷（J–002–170731）、白 术 内 酯 Ⅲ（B–035–160822）、3-羟 基 -9，10-二 甲 氧 基 紫 檀 烷（Q–057–171011）对照品：纯度均大于 98%，成都瑞芬思生物科技有限公司；

对照药材蒙古黄芪（120974–201612）、膜荚黄芪（121462–201304）、白 术（120925–201611）、防 风（120947–201409）：中国食品药品检定研究院；

中药材饮片：来源列于表 1，所有饮片均由山东中医药大学张芳副教授鉴定为正品，黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，（炒）白术为菊科植物白术的干燥根茎的麸炒品，防风为伞形科植物防风的干燥根；

实验用水为娃哈哈纯净水。

1.2 色谱条件

色 谱 柱：Agilent Eclipse XDB–C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司）；

流量：1 mL／min；

柱温：30℃；

进样体积：20 μL；

流动相：以乙腈为流动相 A，以0.05%磷酸水为流动相B，按表2所示浓度变化进行梯度洗脱，进样前以初始流动相条件平衡20 min；

检测波长：230 nm。

1.3 玉屏风散饮片样品溶液的制备

按照《究原方》中玉屏风散配比，取黄芪饮片 6 g、（炒）白术饮片6 g、防风饮片3 g，粉碎，加入10倍量纯净水浸泡30 min，加热回流40 min，过滤；向药渣中加入5倍量纯净水，加热回流20 min，过滤，合并滤液并混匀，于40℃浓缩至相当于原药材含量1.0 g／mL。

取玉屏风散浓缩液 4 mL，置于10 mL容量瓶中，加入甲醇至标线，振摇混匀，于4℃冰箱中放置过夜，将混悬液抽滤，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，得玉屏风散饮片样品溶液。将购自不同药店的10批饮片，按上述方法制备玉屏风散饮片样品溶液10份。

1.4 标准方剂对照溶液的制备

取对照药材蒙古黄芪 0.2 g、白术0.2 g、防风0.1 g，加入50倍量纯净水浸泡30 min，于60℃超声提取20 min，过滤；向药渣中加入25倍量纯净水，于60℃超声提取10 min，过滤，合并滤液并混匀，挥干溶剂，向残渣加入60%甲醇溶液超声溶解，至药液浓度相当于原药材含量0.4 g／mL，振摇混匀，于4℃冰箱中放置过夜，将混悬液以12 000 r／min离心，取上清液，得标准方剂对照溶液。

按上述方法制备膜荚黄芪复方、空白对照溶液对与单味药材溶液。

1.5 对照品溶液的制备

取毛蕊异黄酮苷、升麻素苷、升麻素、5-O- 甲基维斯阿米醇苷、白术内酯Ⅲ、3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷对照品适量，精密称定，用甲醇溶解，制得质量浓度均为100μg／mL的对照品溶液，摇匀，于4℃冰箱中储存备用。

1.6 实验方法

采用高效液相色谱法按 1.2 色谱条件测定玉屏风散饮片样品溶液、标准方剂对照溶液、空白对照溶液与单味药材对照品溶液，得各复方、药对、单味药高效液相色谱指纹图谱，计算各批玉屏风散样品之间、各批玉屏风散样品与标准方剂之间指纹图谱的相似度，对复方指纹图谱中的主要色谱峰进行归属，探讨市售饮片对玉屏风散质量一致性的影响。