2结果与讨论

2.1色谱条件优化

采用 DAD检测器进行190～400 nm全波长扫描并考察美国安捷伦科技有限公司生产的两种色谱 柱Agilent HILIC色 谱 柱（2.1 mm×100 mm，2.7μm）与Agilent Eclipse XDB–C18色 谱 柱（250 mm×4.6 mm，5μm）对玉屏风散饮片样品溶液中各成分的分离效果，结果表明前者分离效果差，后者能实现主要色谱峰的分离且色谱峰信息较全。参考文献［11］，以乙腈 –0.05%磷酸水为流动相，优化梯度洗脱程序，玉屏风散饮片样品溶液中各成分实现较好分离，所得谱图基线平稳、峰形理想。故最终选择Agilent Eclipse XDB–C18色 谱 柱 与 乙 腈 –0.05%磷酸水流动相。

2.2稳定性试验

取同一玉屏风散饮片样品溶液，分别于制备后 0，2，4，8，12，24 h进 样6次 进 行 分 析。 按 相同方法分析单品药材对照溶液。结果显示，各主要色谱峰的保留时间无明显变化，相对标准偏差为0.02%～0.18%；色 谱 峰 面 积 相 对 标 准 偏 差 为0.53%～2.76%（个别色谱峰略高），表明样品溶液在24 h内稳定性良好。

2.3精密度试验

取同一玉屏风散饮片样品溶液，在 1.2色谱条件下连续进样6次进行分析。按相同方法分析单品药材对照溶液。结果显示，各主要色谱峰的保留时间无明显变化，相对标准偏差为0.01%～0.12%；色谱峰面积相对标准偏差为0.62%～2.57%，表明方法的精密度良好。

2.4重现性试验

取同一批玉屏风散饮片，按 1.3方法制备6份样品溶液，在1.2色谱条件下进样分析。结果显示，各主要色谱峰的保留时间无明显变化，相对标准偏差为0.01%～0.22%；色谱峰面积相对标准偏差为0.79%～3%，（个别色谱略大于3%），表明该方法的重现性良好。

2.5玉屏风散饮片样品溶液的测定

在 1.2色谱条件下测定10批玉屏风散饮片溶液、标准方剂溶液、空白对照溶液与单味药材对照溶液，色谱分别如图1、图2所示。

较色谱图，确定了22个共有峰，其中5号色谱峰与相邻峰分离度较好且峰面积稳定适中，故选其为参照峰（S）。通过与空白对照溶液及单味药材对照溶液指纹图谱比较，确定玉屏风散指纹图谱中色谱峰的药材归属。各共有色谱峰的相对保留时间与相对峰面积见表3。

将10批玉屏风散色谱图原始数据导入“中药指纹图谱相似度评价系统软件（2004A）”，以S1为参照谱，利用平均值法计算相似度，计算结果见表4。结果显示，随机选取不同来源的10批玉屏风散指纹图谱差异较大，说明市售药材中化学成分含量有较大的差异，影响了药材的品质。中国药典规定中药黄芪有蒙古黄芪与膜荚黄芪两种正品来源，进一步按1.4方法分别制备含蒙古黄芪与膜荚黄芪的标准方剂溶液，建立玉屏风散水提液标准图谱，以S11为参照谱，利用平均值法计算各批玉屏风散指纹图谱与标准图谱的相似度，计算结果见表5。

由表 5可知，各批玉屏风散饮片指纹图谱与标准方剂指纹图谱相比较，有6批相似度低于0.5，3批在0.5～0.8之间，1批高于0.9。以标准药材的特征指纹峰为参比，对市售药材制备的玉屏风散进行初步质量评定，随机取样的10个药店中，只有一个药店所采购的药材质量令人满意。

3结语

高效液相色谱法具有灵敏度高、分析速度快、应用范围广等优点，高效液相色谱指纹图谱技术既能从全化学成分的角度评价中药饮片与复方，又能体现中医整体性的用药特点，方法简便且稳定可靠，该技术在中药质量标准、药效物质基础等方面的研究中具有重要意义。本次分析结果证明了饮片对复方质量的重要影响，药材生长条件、炮制方法等均会影响中药饮片的质量，进而影响复方的质量，控制复方质量是保证中药质量稳定可控、中医治疗安全有效的主要措施。因此，应将高效液相色谱指纹图谱技术应用于中药全面研究，明确中药药效物质基础，实现饮片与方剂的质量可控