北方伟业计量集团有限公司
在进行中药对照品分离纯化实验的过程中,吸附柱色谱法一直是实验室中最为关键最为常用的方法,其中以硅胶和氧化铝柱色谱应用最广泛。本次主要浅谈一下硅胶层析柱色谱法的注意事项:
1.吸附剂硅胶的用量一般为试样量的30-60倍为宜,若试样的极性偏小,难以分离,可适当提高硅胶的用量。
2.装硅胶柱时,应尽可能选择极性小的溶剂装柱或溶解试样,利于试样在硅胶柱上形成比较狭窄的原始谱带。
3.洗脱时,洗脱剂的极性要逐渐增大,跳跃幅度不能太大,实验中多采用混合溶剂调节极性,以达到梯度洗脱分离物质的目的。
4.为避免发生化学吸附,酸性物质宜用硅胶,而碱性物质宜用氧化铝。在洗脱的过程中,可根据物质的酸碱性,在洗脱剂中适当加入乙酸(分离酸性物质)或二乙胺(分离碱性物质),以防止拖尾,促进分离。
5.选用洗脱剂时,以薄层色谱分析法,组分的Rf值在0.3左右的溶剂系统为最佳洗脱溶剂。
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