一、校准曲线（或工作曲线）的选择

①校准曲线：标准溶液处理程序与样品的分析步骤相比有某些省略时，则制作的校准曲线称为标准曲线；

工作曲线：标准溶液处理程序及分析步骤与样品完全相同；

②如样品基体不干扰测定，采用标准曲线法，用标准溶液直接配制标准系列，进行测定；

样品基体对测定有干扰，则采用工作曲线法，即在标准系列中加入样品基体后测定，或加入样品基体并与同样品处理后测定；

③方法验证不需要考虑选择校准曲线还是工作曲线，按照标准方法操作即可。

二、校准曲线的制作

①校准曲线浓度范围均匀布置包括空白在内的至少6个校准点，每个校准点至少测2次，取平均值；

②校准点尽可能均匀分布在校准曲线范围内；

③相关系数r≥0.999，相关系数只舍不入，保留到小数点后非9的一位，最多保留4位；

④浓度范围一般应覆盖国家限值的0%～150%；

⑤y=a+bΧ，b为斜率，也为方法的灵敏度；a为截距，理论上为0(扣除空白测定信号值)，截距偏离是由测定随机误差、空白值误差和拟合失真三个方面产生的。

三、校准曲线的检验

①线性检验

相关系数r≥0.999；

②多条校准曲线斜率的检验（稳定性检验）

在不同时间，制作同一条曲线，确定校准曲线是否稳定。

用斜率相对偏差（RbD）检验：一般分子吸收分光光度法要求其相对差值小于5%，原子吸收分光光度法要求其相对差值小于10%；

③截距检验

截距为0，是理想的回归曲线，曲线通过原点，由于存在难以控制的随机因素，多数曲线表现为截距不等于0，不通过原点，遇此情况要检验其是否通过原点。

将截距a与0做T检验，当取95%置信水平时，经检验无显著性差异，表示截距检验合格，说明校准曲线的回归方程计算结果准确度高。