菌种活化

菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。[1]

中文名

菌种活化

外文名

activation of culture

领 域

微生物学实验

定义

把微生物从保藏斜面转接到活化斜面上，使其活性得以恢复，相对而言活化斜面培养基中的营养更丰富些，从而使微生物活性恢复的同时恢复其优良的生产性能。[1]

步骤

1、配置菌种适宜生长的培养基。

2、将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻。

3、将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮。

4、挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落培养基：LB培养基，对于含有质粒的菌种可以在活化培养后，接种到含有抗生素的平板上，进行筛选，然后将长出的菌落接种到斜面或者平板上保存。[2]

操作

一般菌种活化操作过程

1、在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已溶解的管中吸取50μL（或1-2滴）的菌液，滴入固态指定培养基（培养基编号及温度示于菌株订购单）某一边缘附近，以划线法接种于培养基。

2、将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。

3、在无菌环境下，以沾有75%酒精的棉花擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。

4、（a）适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。（b）适用于霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。

5、取0.1-0.2ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。

6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期(lagperiod)较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养(Subculture)后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。

7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。

8、未开封之冷冻干燥管，请冷藏于4℃冰箱，切勿冷冻保存。