方案摘要

本方法参照GB/T 5009.97-2003及相关文献资料，对白酒中的甜蜜素经提取后，在冰浴条件下，与亚硝酸钠发生重氮化反应生成衍生物环己醇亚硝酸酯，衍生物进入气相色谱质谱联用仪进行分离检测。

方案详情

概述：甜蜜素是食品生产中常用的甜味添加剂，其甜度是蔗糖的30～40倍,控制限量对人们的身体健康有重要意义。《GB 2760-2014食品添加剂使用标准》中用于界定食品添加剂使用范围的食品分类系统，白酒属于蒸馏酒，不允许使用甜蜜素。本方法参照GB/T 5009.97-2003及相关文献资料，对白酒中的甜蜜素经提取后，在冰浴条件下，与亚硝酸钠发生重氮化反应生成衍生物环己醇亚硝酸酯，衍生物进入气相色谱质谱联用仪进行分离检测。

1实验部分

1.1 仪器与试剂

江苏天瑞仪器股份有限公司气相色谱-质谱联用仪：GC-MS 6800

甜蜜素标准储备溶液：称取一定量的甜蜜素标准品（纯度为99.0％）于干燥容量瓶中，用水配成1000mｇ/kg标准储备溶液。

试剂均为优级纯，试验用水为二次蒸馏水。

1.2 仪器工作条件

1.2.1 气相色谱条件

DB-5毛细管色谱（30m×0.25mm,0.25um）；载气：氦气（纯度为99.999％），载气流量1.0mL/min；进样口温度250℃，进样量1.0uL，进样方式为分流进样,分流比10:1；程序升温：初始温度为40℃，保持时间10min，以25℃/min速率升至270℃，保持时间5min。

1.2.2 质谱条件

电子轰击离子源（EI），四级杆温度150℃，接口温度280℃；采集方式为选择离子监测扫描（SIM），溶剂延迟时间6min,选择3个监测离子质荷比（m/z）为55,81,83。

1.3 实验方法（略）

2 结果与讨论

2.1特征和离子的选择

甜蜜素的主要衍生物环己醇亚硝酸酯作为定性和定量，如图1。保留时间8.511min.定性离子（m/z）为55,81,83。定量离子为55。

2.2前处理条件选择

2.2.1衍生时间选择

准确吸取的1ml甜蜜素储备液溶液按照上述衍生步骤进行衍生化，甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL，衍生反应时间分别设置为10min、20min、30min、40min、50min，考察反应时间对反应的影响。结果表明，随着时间从10min升至30min，衍生物信号响应值逐渐增加，随着反应时间的延长，响应值反而出现降低，因此，衍生反应温度30min最佳。

2.2.2 硫酸浓度的选择

准确吸取的1mL甜蜜素储备液溶液按照上述衍生步骤进行衍生化，甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反应条件下，加入50g/L的亚硝酸钠和分别为50g/L，75g/L，100g/L，125g/L，150g/L。结果表明，酸度从50g/L至100g/L，反应衍生物信号响应值明显增加，浓度升高时，响应值出现减少，因此，最终衍生反应酸度为100g/L。

2.2.3亚硝酸钠浓度对衍生反应的影响

准确吸取的1ml甜蜜素储备液溶液按照上述衍生步骤进行衍生化衍生化，甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反应条件下，加入100g/L的硫酸，和分别为30g/L，50g/L，70g/L，90g/L亚硝酸钠。结果表明，酸度从30g/L至50g/L，反应衍生物信号响应值明显增加，浓度升高时，响应值出现减少，因此，最终亚硝酸钠衍生反应为50g/L。

3 实验数据

3.1 精密度和重复性实验

准确移取储备液500uL于离心管中，用水定容20mL按照上述标样衍生步骤进行衍生化，衍生物浓度为100ug/mL，平行制备反应液6次，用GC-MS测定。考察衍生方法的重现性以及组分保留时间和峰面积的相对标准偏差，6个平行样的谱。结果表明，保留时间RSD为0.98%，峰面积RSD为6.00%,，具体实验数据如下表1所示 。

表1、重复性测试结果

Table 1, repeatable test results

3.2 线性关系和检测限

准确吸取浓度为10ug/mL的甜蜜素标准溶液10ul于50ml离心管中对应衍生物浓度分别为2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL，按照上述标样衍生化步骤进行衍生化，进行线性测试。实验所得线性方程为：y=940.43x-3525.57，线性相关系数为0.9984

3.3回收率测试

选择2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的标样添加浓度，对某品牌白酒进行回收率实验，每个浓度分别做三次平行样，按处理样品的方法处理加标后的样品并测试，采用外标法定量，测试结果如下表2所示。

表2、回收率测试结果

Table 2, the recovery test results

3.4实际样品测试

按照上述样品处理方法对不同品类的白酒样品进行前处理和衍生化，使用GC-MS6800进行测试，测试结果如下表3所示：

注：“N.D”表示“未检出”

表3.、酒中甜蜜素含量测试结果

4结论

本实验采用GCMS-6800，在SIM扫描模式下对酒中的甜蜜素进行测试和分析，方法稳定可靠，线性范围好，灵敏度高，受杂质峰的干扰小，能够有效地对酒中的甜蜜素进行定性定量分析。