笼养是山东省目前肉鸡养殖的一种模式，由于养殖密度高，空间相对狭小，舍内环境中带有微生物的气溶胶不仅污染环境.还可能危害畜禽的健康和各种生长性能。了解笼养肉鸡舍微生物气溶胶在整个养殖周期中分布情况、群落结构及菌群中丰度较高的病原菌属，可间接评价空舍期消毒效果、带鸡消毒效果和微生物气溶胶对工作人员和肉鸡可能带来的危害。因此.本研究采用FA-3型气溶胶粒度分布采样器.对山东省潍坊市昌邑(X)和安丘(A)2个养殖场空舍期消毒前，消毒后，鸡日龄在7、14、21.28.35d时舍内空气样本进行了采样，通过IlluminaHiSeq高通量测序技术"期对细菌多样性进行了分析，并初步探讨了养殖周期中致病菌属的种类和致病性，为笼养肉鸡场生物安全体系的制定提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1鸡舍

笼养肉鸡场位于山东省潍坊市昌邑(X)和安丘(A),品种均为白羽肉鸡，养殖模式均为3层立体笼养，试验期从1日龄开始，饲养至40日龄结束。15日龄前，鸡舍采用小风机通风，通2min,停3min；15日龄后，采用小风机一直通风；28日龄后，用大风机持续通风，从屋顶往下走。2个鸡场粪污均为每天清理，但清粪措施有所差异，其中鸡场X是标准化笼养肉鸡场，具有自动清粪设备；A鸡场是地面网养改建，采用人工清粪。采样时室外温度均为24°C〜29°C,湿度均为55%〜70%。

1.1.2器材和设备

FA-3型气溶胶粒度分布采样器、玻璃纤维滤膜，均为辽阳市康洁仪器研究所生产。

1.2方法

1.2.1样本采集

采用3点采样法，采样位置分别为舍内对角线中心中点、离对角线中心中点12m等距的2个点，距地面1.2m处，采用FA-3型气溶胶粒度分布采样器，气流速度28.3L/min,驱动时间1h,2个养殖场均采集整个养殖周期7个样本，共14个样本。时间分别为空舍期消毒前，消毒后，鸡日龄在7、14、21、28、35d,鸡粪清理冲洗完作为消毒前样本数据，消毒后72h采样作为消毒后样本数据。样本采集时，采样人员与鸡场工作人员均远离采样器。将8层吸附有样本的玻璃纤维滤膜一起装入无菌封口聚乙烯袋中，做好标记,0°C带回实验室，冷冻备用。

1.2.2DNA测序

将不同时间采集的8层玻璃纤维滤膜，用PBS作为溶解液进行合并溶解后作为一个样本，送至北京诺禾致源科技有限公司，应用Illu-minaHiSeqPE250双末端测序法，对细菌16SrDNA的V3-V4区(341F-806R)进行测序。

1.2.3数据分析

处理用Uparse软件对所有样本在97%相似度下的有效数据聚类为操作分类单元(OTU)，用Mothur方法与SILVA的SSUrRNA数据库进行物种注释分析统计各样本的群落组成。使用Qiime软件(Version1.9.1)计算样本的Chaol指数，Shannon指数，Simpson指数，ACE,谱系多样性指数(phylogeneticdiversity,PD)的Alpha多样性值伺，通过花瓣图、物种丰度聚类分析样本间物种群落差异，并进行Beta多样性组间差异分析。