香兰素(4-羟基-3-对甲氧基苯甲醛)是食品和化妆品行业中最重要的香料之一，全世界每年消费1．2万吨以上。利用化学合成法生产的香兰素虽然产量有很大优势，然而消费者更青睐生物法制备的天然香兰素。阿魏酸是谷类麸皮和甜菜浆等常见农业残留物中丰富的天然酚类化合物，来源广泛，成本低廉。

某些放线菌，如Amycolatopsissp．和Streptomycessetonii，具有较高的香兰素生物转化效率，但放线菌发酵液的粘液较高，会使下游的处理工序复杂、成本较高。研究表明，利用生物技术构建的重组大肠杆菌具有原料省、能耗低、污染小、易于后期提纯等优点，是生物转化生产香兰素的一种有前途的微生物。研究表明，在大肠杆菌发酵过程中，AcCoA的消耗通过TCA循环和乙醛酸循环同时进行，icdA基因的敲除会使异柠檬酸盐流入乙醛酸循环而促进香兰素的生产。

透明颤菌血红蛋白(VHb)是透明颤菌(Vitreoscilla)中的一种氧结合蛋白，近年来，人们对透明颤菌血红蛋白基因(vgb)已进行了大量研究，发现该基因的表达能够改善宿主细胞的呼吸强度、降低细胞临界氧浓度、促进细胞高密度培养，可促进宿主细胞的生长，提高目的代谢产物的产量。所以可通过Red重组技术对前期构建的大肠杆菌菌株BW25113::pTAHEF::gltAYB进行vgb基因的整合及icdA基因的敲除，从而生成新菌株BW25113::pTAHEF::gltAYB::vgb△icdA，在以阿魏酸为底物发酵香兰素工业中，用来提高香兰素产量。

1材料与方法

1．1材料

1．1．1菌株及质粒

野生菌E．coliBW25113;工程菌E．coliDH5α::pMv::vgb;质粒pKD13;质粒pKD46;质粒pCP20;工程菌BW25113::pTAHEF::gltAYB;工程菌BW25113::pTAHEF::gltAYBΔicdA。以上菌株和质粒均由本实验室构建或保藏。

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