葫芦巴碱是豆科植物葫芦巴中的提取物，广泛存在于咖啡、紫茉莉根、大豆种子以及火麻仁等中药材中。葫芦巴碱具有治疗肾脏和小腹冷虚、驱寒止痛的药效。相关研究表明，葫芦巴碱还具有降血糖、抗癌和和护肝等活性功能。基于葫芦巴碱的相关生物活性，目前大量的文献报道主要集中于不同植物中葫芦巴碱含量的测定。含量测定的准确性不仅与所使用的仪器有关，还与其使用的标准物质密切相关。目前我国还没有能够对分析检测结果进行量值溯源的葫芦巴碱有证标准物质以及相关的葫芦巴碱标准物质研究报道。纯度标准物质对于农业检测、化学分析等具有十分重要的意义，可直接连接国际基本单位与特性量值。目前，对于纯度标准物质的定值方法常用的主要有质量平衡法、示差量热扫描法和定量核磁法等。笔者以葫芦巴碱为研究对象，分别采用质量平衡法和定量核磁法两种不同原理的定值方法对葫芦巴碱进行定值，考察其均匀性与稳定性，对其不确定度进行评定，研制了葫芦巴碱纯度标准物质。

1实验部分

1.1主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Alliance2695e型，美国Waters公司；制备液相色谱仪：P270Ⅱ型，大连依利特公司；SpherisorbNH2氨基色谱柱：250mm×4.0mm，5μm，美国Waters公司；卡尔费休水分滴定仪：TOLEDODL39型，瑞士MettlerToledo公司；热重分析仪：Pyris1TGA型，美国PerkinElmer公司；核磁共振谱仪：AVANCEⅢ600MHz型，美国Bruker公司；电子分析天平：AE–100型，瑞士MettlerToledo公司；红外光谱仪：NICOLETNEXUS470FT–IR型，美国热电公司；质谱仪：API4000型，美国AB公司；气相色谱仪：TRACE1310型，附带TriPlusTM300型顶空自动进样器，氢火焰离子化检测器，美国ThermoFisher公司；葫芦巴碱盐酸盐：纯度大于98%，中国百灵威科技有限公司；尼泊金乙酯：纯度为99.7%，国家二级标准物质，编号为GBW(E)100064，中国计量科学研究院；氘代甲醇：美国Sigma公司；甲醇：色谱纯，德国Merck公司。

1.2实验方法

1.2.1葫芦巴碱的制备

将葫芦巴碱盐酸盐用制备液相色谱仪纯化，去除其中的盐酸盐及杂质，纯化后的葫芦巴碱纯度大于99%。

1.2.2定性分析

采用红外光谱、质谱对葫芦巴碱标准物质候选物的结构进行表征与鉴定。通过所测定的红外光谱与文献以及数据库检索比对等，确定化合物的主要成分，再利用质谱测定结果进一步确认样品结构。

1.2.3标准物质分装

对已经定性确证为葫芦巴碱的标准物质候选物进行分装，采用棕色磨口试剂瓶，分装150瓶，每瓶为10mg，于常温、避光下储存。

1.2.4均匀性检验

参照JJG1006–1994《一级标准物质技术规范》的步骤对标准物质进行均匀性检验。从已分装的葫芦巴碱中随机抽取20个单元，每个单元取量为10mg，平行取样3次，分别用甲醇配制成10mL葫芦巴碱质量浓度为1.0mg／mL的溶液，利用液相色谱归一化法测定葫芦巴碱的含量，并对标准物质的均匀性统计检验（F检验）。