0引言

糖尿病是当今全球范围的流行病，严重影响大众健康。糖化血红蛋白可以反映120天以来的平均血糖水平且样本稳定不易受到干扰，成为反映人体内真实血糖水平的“金标准”。糖化血红蛋白的含量需要通过糖化血红蛋白分析仪进行测量，该仪器的计量校准或糖化血红蛋白量值的溯源传递均需要大量糖化血红蛋白标准物质，然而目前国内糖化血红蛋白标准物质研制单位及浓度水平都较少，不能满足市场对国家糖化血红蛋白标准物质的需求。鉴于此，本文开展了6个水平系列糖化血红蛋白标准物质研制工作，以便于糖化血红蛋白分析仪的计量校准、糖化血红蛋白检测方法的验证及检测结果的质量控制等。

1仪器与试剂

高效液相色谱－质谱联用仪(Agilent1260型和QTrap5500型，美国安捷伦公司和AB公司);糖化血红蛋白分析仪(G7型，日本TOSOH公司)。同位素标记脯氨酸(美国剑桥同位素实验室);同位素标记亮氨酸(美国Sigma公司);脯氨酸(GBW(E)100084，Pro)和亮氨酸(GBW(E)100058，Leu)国家标准物质(中国计量科学研究院);肽段VHLTPE、D7－VHL*TPE、Glc－VHLTPE和D7－Glc－VHL*TPE由吉尔生化(上海)有限公司合成。试剂均为分析纯。

2HbA1c标准物质的分装

糖化血红蛋白标准物质原料为TOSOH公司市售的糖化血红蛋白HbA1c质控物，包括低值和高值两个水平，低值质控物的标称值为5．0%，高值质控物的标称值为10．0%。将多瓶质控物按照说明书的要求复溶后将同一水平的糖化血红蛋白质控物合并，在混匀器上低速混合1h，分别得到低值和高值的糖化血红蛋白标准物质侯选物。按照表1中的体积比分别移取低值和高值的糖化血红蛋白标准物质侯选物，配制成6个水平的糖化血红蛋白质标准物质侯选物。每个水平的侯选物各配制约5mL，将配制好的侯选物在混匀器上低速混合1h，然后采用G7糖化血红蛋白分析仪对6个水平的侯选物均匀性进行初检，每个水平的侯选物各取5个子样，均匀性检验结果F值小于临界值，未观察到不均匀性。接着，用移液器取10μL标准物质侯选物分装到1．5mL离心管中，每个水平的标准物质各分装200单元，置于－70℃的低温冰箱中冷冻保存。

3标准物质均匀性检验

采用基于高效液相色谱原理的G7糖化血红蛋白分析仪对标准物质的均匀性进行检验。根据JJF1343－2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》的要求，均匀性检验方法的精密度不应低于定值方法，因此首先对G7糖化血红蛋白分析仪测定结果的精密度进行测试。取水平1的糖化血红蛋白侯选物用G7糖化血红蛋白分析仪重复测定10次，测定结果的平均值为5．0%，相对标准偏差仅为0．96%，因此该方法有较高的精密度，可以用于标准物质的均匀性检验。根据JJF1343－2012的要求，每个水平的侯选物分别取出11个单元，采用G7糖化血红蛋白分析仪对每个单元的侯选物重复测定3次。为了消除测定过程中仪器漂移引起的误差，按照1→11→1→11的顺序对样品进行分析。6个水平侯选物均匀性检验结果如表2所示。