北方伟业计量集团有限公司
• 斜面保存法:微生物保存最基本的方法,可广泛用于细菌、真菌等,保存期限非常短,斜面容易干裂。
• 液体石蜡保存法:可用于保存霉菌、酵母菌、放线菌及需氧菌,方法简便,可防止斜面干燥和氧气进入,但一些固氮菌、分枝杆菌、毛霉、厌氧菌等不适宜用此法。
• 甘油冷冻保存法:用于一般细菌的保存,需使甘油终浓度为20%左右,然后-20℃或-70℃以下保存。融化时需要水浴溶化。
• 真空冷冻保存法:具有低温、干燥、无氧的保存条件,适用于98%以上菌种的保存,但操作复杂,一般实验室难以使用。
• 液氮保存法:基本所有微生物均可保存,并且保存时间长,但操作较为复杂而且需要设备,不适用于一般实验室保存菌种。
• 沙土保存法
• 半固体保存法
• 用途:菌种保存、复苏和运输。
• 优点:操作简单方便、菌种保存快速、包装物体积小、菌种保存时间长。
• 操作简单方便:挑取细菌新鲜纯培养物,接入菌种保存管。
• 菌种保存快速:混匀后,吸出冷冻保存液。
• 包装物体积小:1.8ml冷冻管。
• 菌种保存时间长:2-8℃可保存6个月;-20℃可保存12个月;-80℃可保存24个月。
• 被保存的菌种要求是经过纯化后培养 18-24h 内的新鲜菌种(细菌18-24h,酵母菌需3 天,形成孢子的微生物保存孢子,而放线菌和丝状真菌需培养7 天后保存),不宜使用老化或未经鉴定的菌种。
• 菌种保存浓度必须要做3-4 麦氏比浊度,如接种浓度过低将会降低复苏效果。
• 待保存于菌种保存管中的菌种完全乳化均匀吸附在多孔小瓷珠后,要将多余的菌种保存液吸取出来并弃之,否则在复苏时的冻融过程中会损伤菌株活性。
• 做厌氧菌保存时,应提供厌氧的环境,如厌氧箱、厌氧袋,菌种保存管中可通入氮气来驱除保存菌种时所引入的氧气。菌种复苏时,也要创造厌氧的环境。
• 菌种复苏完成后,对使用菌株需要进行再次纯化,以保证菌株的单一性。
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