1．原理

样品经处理后，直接进入高效液相色谱仪分析，以保留时间定性，峰面积定量。

2．试剂

乙腈(HPLC级)、正己烷、氯化钠、超纯水。

3．仪器

高效液相色谱仪，紫外检测器，N2000色谱数据工作站，超声波清洗器，涡旋振荡仪，真空旋转蒸发仪。

4．测定方法

(1)样品处理称取辣椒样品5g置于150mL三角瓶中，加入50mL乙腈，充分搅拌均匀，超声30min，再加入10g氯化钠，搅拌均匀后离心(4 000r／min，lOmin)。取一
半上清液旋转蒸发至干，残渣加入2mL流动相和5mL正己烷，涡旋混合后离心(4 000，／min，5min)，弃去上层正己烷层，下层定容至3mL，过0．45Ixm的滤膜上机检测。

(2)高效液相色谱参考条件

①苏丹红1号：

a．色谱柱：Waters 5C18一Ms一Ⅱ柱（5um，4．6mm×250mm)，室温。

b．流动相：乙腈一水(90／lO，体积比)，流速1．OmL／min，使用前需用超声波脱气处理。

c．检测波长：478nm。

②苏丹红2、3、4号：采用梯度洗脱和变波长的方法

a．色谱柱：Venuses XBP—C18柱(5um，4．6mm×150mm)。

b．流动相：溶剂A(0．1％甲酸水溶液／乙腈：85／15)，溶剂B(O．1％甲酸的乙腈溶液／丙酮=80／20)。

c．梯度洗脱：流速1mL／min。

d．检测波长：520nm。

苏丹红1、2、3、4号同时进样，12min后自动切换波长。

(3)测定点进样品提取液20斗L。并同时进入苏丹红1号品的标准溶液，与标准比较。