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色谱柱的参数,你都了解吗

沈磊-会员头像-www.bzwz.com伟业计量
沈磊 2020-12-29 20:32 评论( 0 ) 浏览( 3770 )

色谱柱是色谱分离的核心,像我们做检验检测以及标准物质的研制的方法优化,经常需要选择购买色谱柱耗材,我们在听从经销商的推荐的同时,自己也要了解色谱柱的各种参数,这样才能选择购买最合适的色谱柱,不被别人忽悠。这里以液相色谱柱举例说明,给大家参考。

1、首先色谱柱的基质

目前基质主要有硅胶、聚合物、氧化铝等。硅胶基质强度大,化学修饰容易,但是一般的适用PH范围2-8(特殊修饰可以达到1-12),聚合物基质的PH范围宽,但是强度不够大,所以重复性效果不及硅胶基质。现在主流使用的是硅胶基质。

2、硅胶基质色谱柱

个人觉得最重要的一个参数就是硅胶的纯度。硅胶纯度和残留金属离子浓度,硅胶的杂质会影响化合物的峰形,硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形,易发生拖尾。(所以有的色谱柱会使用EDTA再生,就是为了消除重金属的影响)

3、硅胶

基质色谱柱按照硅胶的分布有无定型硅胶、球形硅胶、表面多空颗粒(好像也叫核壳柱)。无定型硅胶见于早期色谱柱,现在已淘汰。现在市场上常见的是球形硅胶,表面多空颗粒(核壳柱)也应用很广泛,现在2020中国药典上很多都开始使用。能有效的改善纵向扩散和传质阻力。

4、粒径

常规粒径5μm。粒径越小,分离越快,柱效越高。但柱压力越高,柱容易被污染,寿命低。

5、柱长

一般柱越长,柱效越高,但是相应的分离时间也更长。

6、孔径

孔径小,含孔率高,则比表面积大,载碳量高,对非极性化合物保留能力强。孔径大小必须和分子大小相匹配,分子必须能进入孔内,一般小分子使用80-120A,大分子通常使用300A。为了达到最佳分离,一-般要求孔径直径是分子直径的3倍以上。

7、比表面积

每克填料的表面积,与粒度、孔径有关。比表面积大,会增加样品与键合相之间的反应,增加保留、分离度和制备时的上样量。比表面积小可以缩短分析时间和梯度时的平衡时间。所以比表面积也不是大或者小更好,选择合适的即可。

8、碳载量

硅胶表面键合相的比例。与比表面积,键合覆盖度等有关。对ODS,载碳量从7-18%。ODS的载碳量高,则保留增加, 适合分析非极性化合物。制备色谱的上样量也可以增加。一般影响的色谱柱的选择性,适合难分离化合物。

9、键合相

这个大家都知道,如C8/C18/C30,氨基柱、苯基柱等。

10、封端

有封端色谱柱和未封端色谱柱,两者应用场景不同。未封端的Si-OH基团是碱性化合物拖尾的主要原因,酸性条件下,氢离子通过未封端的Si-OH的间隙进攻-O-Si键,导致填料水解。封端的基团会影响色谱柱的使用pH值、对化合物的选择性等。未封端色谱柱:因为硅醇基的影响,对极性相同的化合物有特殊选择性,一般可以用于100%水相。建议:使用高PH流动相或分析碱性化合物优先选择封端色谱柱,但是如果分析酸性化合物或者低PH范围,也可以使用不封端色谱柱,当然这只是我的看法哈。

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