磷脂酰肌醇-激酶(PI3Ks)属于一个家族信号转导酶，这些脂质激酶的主要作用是特异性地催化磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP2)的3-位轻基磷酸化，生成有第二信使作用物质的磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸酯(PIP3)参与多种生物过程的调节，包括细胞生长、生存、增殖、迁移、存活和细胞内运输口尬。PI3Ks根据其基因序列，同源性和体外脂质底物特异性,被分为3个不同的类别(I类，11类和III类)。其中，研究最广泛的为I类PI3K,此类PI3K为异源二聚体，由1个调节亚基和1个催化亚基组成，1类PI3K进一步分为IA类(包括PI3Kp和5)和IB类2组，其仅包含1个成员PI3K-yMoPI3K和其下游分子Akt所组成的信号通路可以激活下游信号分子，该信号分子在众多的肿瘤发生发展过程中起至关重要的作用页，因此，PI3K抑制剂日益成为肿瘤研究者关注的一个研究热点，被认为是设计肿瘤特异性药物的潜在靶点。

目前，WELKER等曲利用天然产物分离、化学合成等手段研究发现9Wortmannin类化合物、黄酮类化合物、二祜类化合物、囉喘类化合物、唾醴咻类化合物、毗喘类化合物、唾咻类化合物、嗥类化合物、唾喔咻类化合物、毗嗪类化合物、氮杂茂类化合物和三嗪类化合物等不同类型的PI3K抑制剂。这些抑制剂除Wortmannin类化合物外，大多为合成药物，目前报道的天然PI3K抑制剂还十分少见。为了获得天然的PI3K抑制剂，对40种植物的总生物碱提取物和12种天然viridin类似物(与Wort­mannin结构相似)的PI3K抑制活性进行筛选，以期为肿瘤特异性药物研制提供参考。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1中药材

40种中药材样品，均购自兰州黄河药材市场安宁医药公司复兴厚药庄，标本保存于兰州理工大学生命科学与工程学院，由兰州理工大学鉴定。12种viridin类似物，均为研究小组从踝节菌属真菌(TalaromyceswortmanniiLGT-4,Gen-BankAccessionNo.KF850714)中分离得到，该菌为雷公藤TripterygiumTjuilfordi中分离的1株内生菌。其中，化合物1〜4由丁海娥页分离得到，化合物5由孙景云口分离得到，化合物6由智康山分离得到，化合物7〜12由傅广超口2呵分离得到。

1.1.2仪器

HH-4数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)，RE-52CS型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)9PHSJ-3D型pH计(上海雷磁)，多功能酶标仪Spark10M(瑞士帝肯Tecan),384孔酶标板(美国CorningCostar公司)，移液枪(Eppendorf)。

1.1.3药品与试剂

磷酯酰肌醇-3-激酶(PIK3CA/PIK3R192O隅)，底物(PIP2：PSLipidKinaseSubstrate400nmolThermoFisherScien­tific),ADP-Glo™KinaseAssay试剂盒(Pro-mega),GDC-0941(阿拉丁)。

1.2试验方法

1.2.1总生物碱的制备

取中药材粉碎，每100g样品粉末用700mL的95%乙醇水浴回流提取2次，每次2h。抽滤，合并滤液，滤液在减压条件下回收乙醇得浸膏。浸膏被悬浮在100mL蒸憎水中，悬浮溶液用2mol/LHC1调pH至2.0〜3.0o静置过夜后，抽滤，滤液用浓氨水调pH至10.0〜11.0,立刻用等体积的氯仿萃取3次,合并有机相，减压条件下回收氯仿得到总生物碱提取物。此生物碱提取物用于PI3K抑制活性的评价。

1.2.2PI3K抑制活性的测定

采用体外激酶测定方法测定化合物的PI3K抑制活性，PI3K酶的活性通过测量激酶反应后产生的ADP的量来确定。试验均在室温下的384孔板中进行。具体实施步骤：配置激酶缓冲液，其中包括50mmol/LHepes(pH7.5),3mmol/LMgCl2100mmol/LNaCl,1mmol/LEGTA,0.03%CHAPS和2mmol/LDTTOPI3K激酶使用激酶缓冲液稀释到0.9ng/MLo配置ATP/底物混合物，其中包括5Mmol/LPIP2/PS和25Mmol/LATPo待测化合物用100%的DMSO稀释到10mmol/Lo向384孔板中的每个孔中加入2mL稀释的化合物和4mL的ATP/底物混合物。之后在各个孔中加入4mL的PI3K激酶混合液后避光下反应1ho之后在每个孔中加入10mLADP-G1°tm试剂，孵育40min后在每个孔中加入20吐激酶检测试剂(KinaseDetectionReagent)遮光反应30mino最后在多功能酶标仪中测量化学发光值,计算抑制率。