小麦(TriticumaestivumL．)是三大谷物之一，2010年小麦成为世界上总产量位居第二的粮食作物(6．51亿t)，仅次于玉米(8．44亿t)。小麦富含淀粉、蛋白质、脂肪、矿物质、钙、铁、硫胺素、核黄素、烟酸及维生素A等。小麦成熟和收获的季节通常伴随着潮湿多雨的天气，导致大量小麦发芽，从而影响小麦的品质。然而，文献资料表明，发芽小麦具有抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、增强免疫力、延缓衰老、降胆固醇、降血脂、降血糖等功能。发芽过程中小麦会形成多种生理活性物质，如γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid，GABA)，它是一种非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质。

目前对发芽小麦中活性成分的研究主要集中于发芽小麦γ-氨基丁酸的富集、提取和应用，而对其中的酚类化合物关注较少。本研究以扶麦1228为实验材料，研究小麦发芽过程中酚类化合物(酚酸和黄酮)种类及含量的变化，比较发芽时间对其影响，并探讨这一过程的抗氧化活性变化，为发芽小麦深加工提供参考。

1材料与方法

1．1材料与试剂

试验材料:小麦(扶麦1228，产自湖北省，市售)，甲醇(HPLC级纯度，产自TEDIA)，乙腈(HPLC级纯度，产自TEDIA)，2，4，6-三(2-吡啶基)三嗪(TPTZ，分析纯)，1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，分析纯)，2，2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS，分析纯)，蒸馏水，其他分析纯试剂购自国药集团化学试剂有限公司。

1．2仪器与设备

人工气候培养箱，亿恒科技有限公司;烘箱，上海精宏实验设备有限公司;万能粉碎机，天津泰斯特仪器有限公司;紫外分光光度计(UV-1800PC)，MAPADA;低速离心机(SC-3612)，中佳;纯水机，优普特;超声波清洗机(SB-5200DTN)，宁波新芝生物科技股份有限公司;数显恒温水浴锅(HH-Z)，国华电器有限公司;万分之一电子天平(LE204E)，MettlerToledo;UPLC，美国Waters。

1．3试验方法

1．3．1不同发芽时间发芽小麦的制备

随机选取20粒小麦种子，测得平均粒长为(0．71±0．03)cm。按照《GB/T5520—2011粮油检验籽粒发芽试验的方法》制备不同发芽时间的发芽小麦，按照0、2、5、8和11d的发芽时间使小麦发芽。将发芽好的小麦放到50℃的热风干燥箱里面烘10h，然后将烘干的发芽小麦放进万能粉碎机里面粉碎2min，得固体粉末待用。

1．3．2样品提取方法

称取粉碎好的不同发芽时间样品粉末各0．5g于25mL锥形瓶中，按照1∶20(g∶mL)料液比添加体积分数为60%甲醇溶液。将样品放在超声波清洗机中以60℃温度下超声90min。超声完毕后，将提取液放入15mL离心管中以2194×g离心25min，取上清液，放入4℃冰箱贮藏。

1．3．3总酚含量的测定

准确称取没食子酸对照品10mg，用超纯水溶解并定容到10mL，质量浓度为1mg/mL。吸取没食子酸对照液0、0．04、0．08、0．16、0．24、0．32、0．40、0．48、0．56mL于10mL容量瓶并用体积分数为60%的甲醇溶液定容。各加入1．0mL福林试剂和2．0mL质量浓度200g/LNa2CO3水溶液，(50±1)℃恒温水浴中加热30min后，用水冷却并稀释至25mL。室温放置30min，在1cm比色杯测定745nm处吸光度。以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。取1mL的待测液，按标准曲线制备的步骤，于745nm处进行吸光度的测定。

1．3．4总黄酮含量的测定

准确吸取芦丁标准溶液0、0．50、1．00、2．00、3.00、4．00mL，相当于芦丁0、75、150、300、450、600μg移入10mL刻度比色管中，加入体积分数为30%的乙醇溶液至5mL，各加5g/LNaNO2溶液0．3mL，振摇后放置5min，加入10g/LAl(NO3)3溶液0．3mL摇匀后放置6min，加1．0mol/LNaOH溶液2mL，用体积分数为30%的乙醇定容至刻度，以零管为空白，摇匀后用1cm的比色杯在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线或求取线性回归方程。根据标准曲线计算出试样的黄酮含量。

1．3．5超高效液相检测酚类化合物种类及含量

UPLC分析条件为:Thermo色谱柱HypersilGold(150mm×2．1mm，1．9μm);进样量1μL;流速0．2mL/min;柱温40℃，PDA检测波长为280nm;流动相A为甲醇和乙腈等比例混合的溶液，流动相B为体积分数2．5%的乙酸溶液，超高效液相色谱梯度洗脱条件为:0～6min，20%A;6～15min，40%A;15～18min，70%A;18～24min，5%A。以没食子酸、咖啡酸、羟基酪醇、香草醛、对羟基苯甲酸、绿原酸、芹菜素、没食子酸、阿魏酸、芦丁、对香豆酸、木犀草素为标准品绘制标准曲线，以保留时间定性、峰面积定量检测不同发芽时间发芽小麦中上述酚类化合物的含量。