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坛紫菜多糖的分离纯化及其组成分析

大C-会员头像-www.bzwz.com标准物质网 大C 0 408 2021-07-17
【摘要】采用热水提取坛紫菜多糖,经分离纯化得到3个多糖组分(分别命名为SP1、SP2及SP3)。通过红外光谱和气相色谱对多糖组分进行分析,并用化学法测定多糖组分中的硫酸根、糖醛酸、半乳糖及3,6-内醚半乳糖含量。测定结果表明,SP1的单糖组成中含半乳糖96.53%、鼠李糖1.225%、岩藻糖0.85%、阿拉伯糖1.37%、木糖1.16%;SP2、SP3的单糖组分为半乳糖,而无其它单糖。3种多糖的硫酸基含量分别为(8.54±0.44)%、(10.24±0.23)%及(12.35±0.58)%,糖醛酸含量分别为(15.00±0.23)%、(10.46±0.55)%及(11.50±0.35)%,3,6-内醚半乳糖含量分别为(6.84±0.43)%、(4.99±0.24)%及(4.56±0.36)%。
  • 紫菜(Porphyrahaitanensis)主要分布在我国南方省份的海洋中,为我国重要的人工养殖的经济海藻。目前除了作为普通海洋食品外,还是生产琼胶等化工、医药的原料。紫菜多糖(porphyrapolysaccharide)由于其特殊的结构和组成,以及具有抗辐射、抗肿瘤、降血脂和抗衰老等生理活性,成为国内外的研究热点。

    目前,对坛紫菜多糖结构与成分的研究较少。高洪峰等对南北方坛紫菜多糖结构的差异性进行了研究。周慧萍等研究了紫菜多糖的抗凝血和降血脂作用。本文采用热水提取坛紫菜的天然多糖,并进行分离纯化。

    1材料与方法

    1.1材料和仪器

    坛紫菜:人工养殖海藻,采自福建晋江市。原料采集后洗净、晾干,经80℃烘干2h,粉碎,过80目筛,即坛紫菜干粉,保存备用。试剂:二乙氨基乙基纤维素52(DEAECellulose-52)、葡聚糖凝胶G-100(SephadexG-100);标准葡萄糖、岩藻糖木糖阿拉伯糖鼠李糖甘露糖半乳糖半乳糖醛酸葡萄糖醛酸肌醇,Sigma产品;浓硫酸蒽酮、95%乙醇等试剂均为国产分析纯。仪器:自动部分收集器(BSZ-100-LCD),上海琪特分析仪器有限公司;紫外分光光度计(Cary50Probe),美国瓦里安公司;红外光谱仪(FT/IR-480),美国布鲁克光谱仪器公司;气相色谱仪(CP3800),美国瓦里安公司。

    1.2坛紫菜多糖的提取

    取一定量的坛紫菜干粉于烧杯中,按1∶30加蒸馏水,100℃水浴锅中搅拌加热5h,离心(4500r/min,10min)取上清液,减压浓缩,碱性蛋白酶法脱除蛋白质,加95%乙醇使其终质量分数为80%,使多糖脱水沉淀,离心(4500r/min,10min)取沉淀物,冷冻干燥得到坛紫菜粗多糖,保存备用。

    1.3坛紫菜粗多糖的分离纯化

    配制质量浓度为20mg/mL的坛紫菜粗多糖溶液,将该溶液透析后上样于DEAECellulose-52层析柱(2.6cm×30cm),流速为0.5mL/min,自动收集器收集。上样体积5mL,上样量100mg,每管收集5mL。依次用蒸馏水及0.1、0.2、0.3、0.5和1mol/LNaCl溶液分段梯度洗脱。洗脱时,采用蒽酮-硫酸法对洗脱液进行跟踪测定,直至无多糖检测出为止。合并各洗脱组分峰部分,各主要洗脱峰经超滤浓缩,上样于SephadexG-100柱层析,蒸馏水洗脱,流速0.2mL/min,15min/管,采用蒽酮-硫酸法跟踪检测洗脱峰,超滤浓缩,冷冻干燥得到精制多糖。

    1.4紫外光谱分析

    取精制后的多糖配成质量浓度为1mg/mL的溶液,用紫外分光光度计在波长200~400nm区域进行扫描。

    1.5红外光谱分析

    分别取1~2mg干燥的精制紫菜多糖,与100mg干燥的KBr混合、研细后压片,在400~4000cm-1区间进行红外扫描。

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