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坛紫菜(Porphyrahaitanensis)主要分布在我国南方省份的海洋中,为我国重要的人工养殖的经济海藻。目前除了作为普通海洋食品外,还是生产琼胶等化工、医药的原料。紫菜多糖(porphyrapolysaccharide)由于其特殊的结构和组成,以及具有抗辐射、抗肿瘤、降血脂和抗衰老等生理活性,成为国内外的研究热点。
目前,对坛紫菜多糖结构与成分的研究较少。高洪峰等对南北方坛紫菜多糖结构的差异性进行了研究。周慧萍等研究了紫菜多糖的抗凝血和降血脂作用。本文采用热水提取坛紫菜的天然多糖,并进行分离纯化。
坛紫菜:人工养殖海藻,采自福建晋江市。原料采集后洗净、晾干,经80℃烘干2h,粉碎,过80目筛,即坛紫菜干粉,保存备用。试剂:二乙氨基乙基纤维素52(DEAECellulose-52)、葡聚糖凝胶G-100(SephadexG-100);标准葡萄糖、岩藻糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、肌醇,Sigma产品;浓硫酸、蒽酮、95%乙醇等试剂均为国产分析纯。仪器:自动部分收集器(BSZ-100-LCD),上海琪特分析仪器有限公司;紫外分光光度计(Cary50Probe),美国瓦里安公司;红外光谱仪(FT/IR-480),美国布鲁克光谱仪器公司;气相色谱仪(CP3800),美国瓦里安公司。
取一定量的坛紫菜干粉于烧杯中,按1∶30加蒸馏水,100℃水浴锅中搅拌加热5h,离心(4500r/min,10min)取上清液,减压浓缩,碱性蛋白酶法脱除蛋白质,加95%乙醇使其终质量分数为80%,使多糖脱水沉淀,离心(4500r/min,10min)取沉淀物,冷冻干燥得到坛紫菜粗多糖,保存备用。
配制质量浓度为20mg/mL的坛紫菜粗多糖溶液,将该溶液透析后上样于DEAECellulose-52层析柱(2.6cm×30cm),流速为0.5mL/min,自动收集器收集。上样体积5mL,上样量100mg,每管收集5mL。依次用蒸馏水及0.1、0.2、0.3、0.5和1mol/LNaCl溶液分段梯度洗脱。洗脱时,采用蒽酮-硫酸法对洗脱液进行跟踪测定,直至无多糖检测出为止。合并各洗脱组分峰部分,各主要洗脱峰经超滤浓缩,上样于SephadexG-100柱层析,蒸馏水洗脱,流速0.2mL/min,15min/管,采用蒽酮-硫酸法跟踪检测洗脱峰,超滤浓缩,冷冻干燥得到精制多糖。
取精制后的多糖配成质量浓度为1mg/mL的溶液,用紫外分光光度计在波长200~400nm区域进行扫描。
分别取1~2mg干燥的精制紫菜多糖,与100mg干燥的KBr混合、研细后压片,在400~4000cm-1区间进行红外扫描。
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