1引言

近年,随着人们生活水平的日益提高,食品安全及食品的真伪性越来越受大众关注,消费者们对肉制品安全性及质量的要求也随之提高。不法个体商人将掺伪、造假肉食品投入市场经营,将价格低的猪肉掺入到价格高的牛羊肉中,这些行为均直接侵害了广大消费者权益,也无法保证产品的质量安全。因此,加强猪源性成分在牛羊肉中的检测势在必行且具有重要的社会意义。

目前,分子生物学检测技术已经用于国内外许多实验室的肉制品中动物源性鉴定,并且检测方法也很多样化。FAPAS(FoodAnalysisPerformanceAssessmentScheme)是目前全球最权威的专门从事食品检测分析方面的能力评估体系,其通过实验室间测试结果的比对来判定实验室能力。借助实验室能力验证的外部措施,可以补充实验室内部的质量控制程序,也补充了由技术专家进行实验室现场评审的手段。通过能力验证可以客观地考核实验室的检测能力和体系管理,监管机构借此来确定检测实验室的能力和水平,另一方面,也可提高客户对本实验室的信任程度,有利于实验室的生存与发展。

2材料及方法

2.1实验材料

样品由FAPAS英国总部提供,于2018.4.16寄出并邮件通知,全程冷链运输,到达本实验时间为2018.4.25,要求在2018.5.31前在其官方网站填报实验结果信息。样品编号为3108A-47、3108B-19,干粉末肉松状,真空密封包装。阳性对照为检出猪源性成分的牛肉的能力验证留样,阴性对照为未检出猪源性成分的牛肉的能力验证留样。

2.2实验试剂

牛源性成分及猪源性成分的正向引物、反向引物、探针均按照SB/T10923-2012提供的序列信息合成(上海辉睿生物科技有限公司);MasterMix(2×)(美国ABI公司);MericonFoodKey核酸提取试剂盒(德国QIAGEN公司)。

2.3实验仪器

核酸提取仪(德国QIAGEN公司);实时荧光PCR仪(美国ABI公司)。

2.4实验方法

参照组织方提供的作业指导书、SB/T10923-2012进行实验。

2.4.1样品DNA提取

根据组织方提供的作业指导书要求,将80mL蒸馏水与牛肉粉末混匀,静置至少30min后立即开始实验。分别取200mg均质好的样品于1.5mL离心管中,每个样品提取3个平行,按照MericonFoodKey核酸提取试剂盒说明书进行样品DNA提取,可用紫外分光光度对提取的DNA进行测定,OD260/OD280在1.8~2.0之间即可用于PCR扩增。

2.4.2PCR扩增

由于已知样品本身是牛肉粉末,所以本次实验牛源性每个样品提取管反应体系设置2孔平行,猪源性设置3孔平行,样品反应体系配制见表1,反应体系为20μL。