邻苯二甲酸酯(PAEs)是指邻苯二甲酸的酯化衍生物．作为塑化剂，PAEs广泛应用于塑料、涂料、油墨的生产中，同时也可添加于驱虫剂、发胶喷雾剂、指甲油和火箭燃料中，但PAEs对人类健康具有严重危害．PAEs与塑料之间的结合并不紧密，很容易脱离塑料本体进入环境中，因而PAEs已被很多国家限制使用，美国国家环保局将其列为环境优先污染物，同时PAEs也被人们称为“第二个全球性PCB污染物”．邻苯二甲酸二丁酯(DBP)是应用最为广泛的PAEs之一，主要用于制造塑料制品增塑剂、染料溶剂、橡胶助剂等．本文以DBP为研究对象，研究其对小鼠的肝脏和睾丸的毒性作用，从自由基损伤和生殖毒性角度探讨了DBP的详细致毒机制．

1实验

1．1实验材料与仪器

主要实验材料包括产白天津市富宇精细化工有限公司的DBP(化学纯)，产自上海华联制药有限公司的注射用环磷酰胺，产自南京建成生物制品公司的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、碱性磷酸酶(AKP)与水合氯醛(分析纯)，产自中粮北海粮油工业(天津)有限公司的色拉油，以及购于哈尔滨医科大学动物中心的昆明种小鼠．主要实验仪器包括德国弗鲁克F6／10型超细匀浆器、T6新世纪紫外可见分光光度计、产自上海博停经贸有限公司的QL一861型涡旋混合振荡器、产自北京医用离心机厂的LD一2A型台式低速离心机、HH—S恒温水浴锅、Et本OlympusBS60型万能显微镜、中国爱华TSJ一1型全自动组织脱水包埋机、德国莱卡2135型轮转式生物切片机与日本JEM一1220型透射电子显微镜．

1．2实验方法

1．2．1DBP染毒与分组

选用体重为(30±5)g的雄性昆明种小鼠，通过灌胃进行染毒，共设4个实验组，包括1个空白对照组与3个染毒剂量组．不同染毒组的染毒剂量分别相当于1／2LD1／4LD50和1／8LD每组连续染毒14d，染毒期间各组均正常进食和进水．末次染毒结束后，禁食禁水，于第15d处死小鼠．

1．2．2脏器系数与关键酶的测定

于第15d对小鼠进行眼眶取血，经离心处理10min后吸出上层血浆，分别检测血浆中AKP、GOT和GPT的活力．摘取小鼠的甲状腺、肺、脾、胸腺、肝脏、睾丸、附睾、前列腺、心脏和肾脏组织，吸去多余的血液和组织液，称其湿重，计算脏器系数(脏器的湿重与体重的比值)．随后摘取小鼠的部分肝脏组织，利用低温生理盐水进行漂洗，再利用pH为7．4的磷酸盐缓冲液(PBS)制备质量分数为10％的肝脏组织匀浆，测定其MDA与蛋白含量，以及CAT、SOD活力．

1．2．3小鼠精子畸形实验

选用体重为30g的性成熟雄性昆明种小鼠进行精子畸形实验．在DBP染毒处理过程中将小鼠随机分成5组，包括1个空白对照组、1个CP阳性对照组与3个染毒剂量组，不同染毒组的染毒剂量分别相当于1／2LD5()、1／4LD。和1／8LD每天染毒1次，连续灌胃染毒5d，于末次染毒后的第30d处死小鼠．摘取小鼠的一侧附睾进行制片与伊红染色，在高倍显微镜下每只小鼠计数500只完整精子，计算其精子畸形率．

1．2．4HE染色

将各实验组小鼠的肝脏和睾丸迅速取出后，利用生理盐水冲洗组织块上的血液和黏液，并将其固定在甲醛溶液中．一段时间后将固定后的组织脏器取出，按照需要改刀成1cm×2cm×0．2cm的组织块后，投入甲醛固定液中．室温下保持4h后取出组织块．首先利用流水对组织块进行为时30min的冲洗，随后对其进行脱水处理．在脱水处理过程中乙醇的体积分数分别为75％、85％、95％和100％，相应的脱水时间均为2h．之后对组织块进行二甲苯透明处理和石蜡包埋处理．将切片用具备好，修正并固定好包埋蜡块后，即可进行切片．切片厚度一般约为6m．将石蜡切片放入水浴锅中，然后利用粘片剂将其粘贴在已用酒精处理后的载玻片上．在37．5℃恒温箱中烤片2h后，对切片进行苏木素(H)伊红(E)染色．

1．2．5组织观察

将各组小鼠肝脏、睾丸改刀成1nllll宽的细条并固定于戊二醛溶液中，保持48h后采用浓度为0．1mol／L的PBS溶液充分漂洗．利用锇酸将各组织固定后，进行梯度丙酮脱水处理并采用饱和醋酸铀溶液进行块染．然后进行脱水处理与环氧丙烷置换处理．利用环氧丙烷和环氧树脂混合液将组织浸透后再用纯包埋剂将其浸透，随后进行烤干、超薄切片处理．最后利用醋酸双氧铀一柠檬酸铅对组织进行双染色处理．利用JEM一1220型透射电子显微镜对组织进行观察．此外，所有实验数据均需要利用SPSS13．0软件进行t检验．