在硝酸盐氮的诸多测定方法中，酚二磺酸分光光度法由于测量范围较宽、显色稳定、测量仪器易得成为测定硝酸盐氮的常用方法。但是，在实际样品分析中往往会出现加标回收率偏高的现象，究其原因，在酚二磺酸分析方法中，校准曲线的测定条件与样品的测定条件不一致，不知这是否是引起加标回收率偏高的原因。为此，在按照分析方法测定标准曲线的同时，也进行工作曲线的测定，并将标准曲线与工作曲线进行比较。经统计检验，标准曲线与工作曲线之间存在着系统误差。

１校准曲线的绘制

１.１测定条件的选择

酚二磺酸法的测定原理是硝酸盐氮在无水情况下与酚二磺酸反应生成硝基二磺酸酚，在碱性溶液中生成黄色化合物，进行测定。在分析过程中，首先要将水样置于蒸发皿内在水浴上蒸干，为避免蒸发过程中硝酸盐氮的损失，需用氢氧化钠溶液调节样品ｐＨ值至８，样品的ｐＨ值过高或过低均会对测定结果产生影响。在酸度计上测得５０ｍＬ硝酸盐标准溶液中加入１滴０.１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液的ｐＨ为１０左右，溶液ｐＨ值过高。因此，在样品测定的实际操作中，将氢氧化钠溶液的浓度改为０.０２５ｍｏｌ／Ｌ，滴加２滴，即可达到样品ｐＨ值８的要求。实验证明瓷蒸发皿表面的光洁度对测定结果也会产生影响，瓷蒸发皿长期在偏碱性条件下使用表面会受损，容易对硝酸盐吸附而影响测定结果。因此，在样品测定中应选用表面光洁的瓷蒸发皿以减少瓷蒸发皿对被测物质的吸附。

１.２校准曲线的测定

标准曲线的测定：吸取５０.００ｍＬ硝酸盐贮备液置于蒸发皿内，加入２滴０.０２５ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液，在水浴上蒸发至干。加入２.０ｍＬ酚二磺酸，用玻棒研磨蒸发皿内壁，使残渣与试剂充分接触，放置片刻，再重复研磨一次，放置１０ｍｉｎ，加入少量水，将溶液移入５００ｍＬ溶量瓶中，稀释至标线，混匀，得到０.０１０ｍｇ／ｍＬ标准使用液。按标准系列吸取适量的标准使用液于５０ｍＬ比色管中，加水至约４０ｍＬ，加３ｍＬ氨水使成碱性，稀释至标线，混匀。在波长４００ｎｍ处以水为参比，以１０ｍｍ比色皿光程测量吸光度。工作曲线的测定：将硝酸盐贮备液用纯水稀释成０.０１０ｍｇ／ｍＬ硝酸盐使用液，按标准系列吸取适量的使用液于各蒸发皿中，加水至５０ｍＬ，加入２滴０.０２５ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液，在水浴上蒸发至干。加入１.０ｍＬ酚二磺酸，用玻棒充分研磨蒸发皿内壁，放置片刻，再重复研磨一次，放置１０ｍｉｎ，将溶液移入５０ｍＬ比色管中，加入３ｍＬ氨水显色，定容，在波长４００ｎｍ处比色皿光程１０ｍｍ以水为参比测量吸光度。在制备一份硝酸盐标准使用液的同时，测定一条工作曲线。标准曲线、工作曲线各测定４次。

１.３测定结果

由测得的吸光度值减去零浓度管的吸光度值，绘制校准曲线。结果见表１。

２方法误差分析

方法误差分析的步骤：为了避免偶然性，在误差分析过程中对多条曲线以及其平均水平进行了比较。首先对各校准曲线回归直线的线性密切程度（相关系数）和截距（ａ＝０）进行统计检验，以考查校准曲线的绘制是否达到要求。若校准曲线绘制合格，再进行任意两条标准曲线之间的比较，如果检验结果无显著差异，将四条标准曲线进行合并得到一条平均标准曲线。对工作曲线也进行同样的检验，无显著差异，再进行四条工作曲线的合并。然后对同步测定的标准曲线与工作曲线及合并后的标准曲线与工作曲线进行比较，看其是否存在差异。