生物素是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质，是一种维持人体自然生长和正常人体机能所必需的水溶性维生素，也是维持正常成长、发育及健康必要的营养素，无法由人工合成。 当人体缺乏时会产生精神疲乏、恶心、呕吐、贫血、鳞状皮炎等症状。 目前，生物素常作为添加剂添加在食品、饮料以及家禽家畜的饲料中。 国家标准对婴儿食品生物素添加剂也有相关要求。

已报道的生物素检测方法中，常用的方法有酶联免疫法、气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法 和质谱法等，这些方法大多是相对测量的方法，需要用生物素标准物质作为测量标准才能准确定量。 目前未见国内外有关生物素标准物质的报道。

研制具有准确纯度及不确定度水平的生物素纯度标准物质，对食品检验具有重要意义，也是国家量值溯源能力的重要保证。 笔者根据国际标准化组织ISO导则35及JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则》及统计学原理研制了生物素标准物质。

一、实验部分

1.主要仪器与试剂

Agilent 1100型高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器 （DAD）；Perkin Elmer公司Pyris 1型热重分析仪 （TGA）；Perkin Elmer 公 司Pyris 1型差示扫描量热仪（DSC）；布鲁克公司Bruker AVANCE DRX-600（NMR）； Agilent 7500c型电感耦合离子体质谱仪（ICP-MS）。 Inertsil ODS-3，250mm×4.6×5μm液相色谱柱（GL Science Inc.日本）。 生物素（购自美国Sigma_Adrich）。 乙醇为色谱级，德国Merck公司，其余试剂为分析纯。 实验用水皆为二次去离子水。

2.原料获得及标准物质

生物素标准物质候选物，经理化测试、定性分析、 初步测定确定其纯度在99％以上， 均匀性初检合格后，分装到事先清洗、干燥的棕色小玻璃瓶中，每瓶 20mg，共200瓶，4℃下储存。

3.定性分析

采用红外光谱法对生物素标准物质主成分进行定性分析， 所用仪器为Thermo公司Thermo Scientific NICOLET iS10型傅立叶变换红外光谱仪。

4.定值分析

采用质量平衡法与差示扫描量热法（DSC）两种不同原理的方法对生物素标准物质进行定值分析。

（1）质量平衡法

质量平衡法即扣除杂质法，计算公式如下： P=Po（1-Xv-Xw-Xa-Xe） 式中：Po——液相色谱法纯度；Xv——挥发性物质的含量；Xw——水分含量；Xa——灰分的含量；Xe—— 无机元素的含量。

①液相色谱法

（HPLC）纯度 采用液相色谱归一化法测定的纯度Po，研究中高效液相色谱法根据文献进行条件优化，即考虑检测波长、流动相比例和流动相pH值等因素，加以优化使杂质与主成分完全分离，保证最小检测峰面积0.005%以上的组分均能检出，满足定值要求。 确定的高效液相色谱法条件如下： 流动相为乙醇与0.05mmol·mL-1 KH2PO4缓冲溶液，缓冲溶液用H3PO4调pH值至4.50，流动相比例为25∶75，等度洗脱；流速：1mL·min-1 ；进样量：10μL；样品为 0.5mg·mL-1 生物素乙醇溶液；检测波长：215nm；定值波长215nm； 保留时间：5.02min； 色谱柱：Inertsil ODS- 3.250mm×4.6×5μm（GL Science Inc.日本）。

②其他杂质定值

水分和挥发性物质采用热重分析法（TGA）进行测定，灰分测定依据GB/T9741-1988《化学试剂灼烧残 渣测定通用方法》测定灼烧残渣，无机元素测定是基于DZ/T0223-2001电感耦合等离子体质谱 （ICP-MS）分析方法通则，采用Finnigan MAT的HR-ICP-MS进行分析测定，测定了73种无机离子。