Stabilityofthe lutein standard solution

YANG Jie，GAO Jie，FANG Cong-rong，MIAO Hong，ZHAO Yun-feng

(ChinaNationalCenterforFoodSafetyRiskAssessment，Beijing 100021)

Abstract： Studyonthestabilityofthediferentluteinsolutioninordertoprovidebasistodeterminatetheluteincontent accurately．Selecteddichloromethane，acetone，mix—solvent(n—hexane：acetone：dichloromethane：ethanol10 ：7：7：6)asthesolventtodissolvetheluteinstandardmaterial，andmadeintohighandlowlevelofconcentrationof standardsolution，placedthestandardsolutionforthecertaintimeunderfourdiferentstorageconditions(一20~C， 4~C，darkplaceatloom temperature，natural lightatloomtemperature，directsu~ightatroom)，determinatedthe responsepeakareawithhighperformanceliquidchromatography(HPLC)，calculatedthepreservationrateandanalyze therespectivefactorsinfluencewiththeT —teststatistics；Theresultsindicated thatthesolutioncould makesomeim— pacton thestan dard stab le， thestability ofthelutein stan dard dissolved with acetonewaslessthanwith dichlorometh— an eandmix—solvent；thetemperatureand thelightalsoafectedthestandard stab le， theluteinstandardunderthedirectsunshineatloom temperaturedecreaserapidly，theluteinstab ilityunderthedark placewerebetterthan underthe naturelight， andthelow temperaturecoulddelaythelutein degradation． Keywords：lutein；standard solution； stability

叶黄素 ，又名 “植物黄体 ”，其结构式见 图 1，是一种重要的抗氧化剂 ，近年来 ，常将其作为保健食 品的功效 成分 ，其含 量结果 也成 为 了保健食 品检 验的重 要 的参评 依 据 ，但 叶黄 素 具有很强的 氧化 降解性 ，在 其 测定 过程 中，经 常会 因叶黄 素标准 溶液 和叶黄 素在提 取过程 中 的不 稳 定 性 而 影 响 最 终 的测 定 结 果 。虽 有 文 献从 叶黄素 的加 工 工 艺 上进 行 过 光 、热 、 PH、金属离子 、氧化剂还 原剂等 因素对 叶黄 素 稳定性研究 进行 过报导 ，但针 对 于测定保 健食 品中叶黄素含 量 的过 程 中可能产 生 的不稳 定性 因素还未有 提及 。所 以本 研究 主要 就是针 对不 同的提取溶 剂对 叶黄素标 准 品进 行 溶解 ，模拟 实验过程 中可 能储存 放置 的条件 进行稳定 性研 究 ，以便 了解 叶黄素在不 同时间段 的降解情况 ， 有利于实验 过程 中合理 的选择 配制 、提 取溶 剂 放置标 准溶 液 ，为准确测 定保 健食 品 中的叶黄 素含量提供参考依据 。

1．1 材料 与 仪器

本法除另有说 明，所有试剂均为色谱纯 ，所 用水均 为 去 离 子 水。叶 黄 素 标 准 物 质 (纯 度 89．39％ ，购 自浙 江新 昌制 药公 司)；二氯 甲烷 (购 自 DIMA 公 司 )；丙 酮 (购 自 DUKSAN 公 司)；甲苯 、正 己 烷、 乙酸 乙 酯 (购 自 J．T． Baker公 司 )；乙醇 (购 自北 京化 工 厂 )；乙腈 (购 自 Fisher 公 司 )；高 效 液 相 色 谱 仪 ： waters600。

1．2 稳定 性试 验

1．2．1 储备液稳定性试验

分别用二氯 甲烷 、丙酮 、混合溶剂配制叶黄 素标准溶液储备液 (1m mL)，并将其置于棕色 容量瓶 中，放 置于 4℃ 、 一20℃ 冰箱 内，搁置 0h、12h、24h、72h、1周 、2周 、3周 、4周 ，模 拟叶黄素储备液储存条件 ，测定其稳定性结果 。

1．2．2 工作液稳定性试验

分别用二氯 甲烷 、丙酮、混合溶剂配制叶黄 素标准 工作 液 (40 mL和 100 mL)，放 置 于 4~C冰箱 内、室温 自然 光 (透 明玻璃容量瓶 不暗 置)、室温暗置 (棕色玻璃 容量瓶 ，暗 置在封闭 的实验柜中)、室内阳光照射 (透明玻璃容量瓶 ， 放置于通风 的窗 口旁边 ，盖帽紧旋容量瓶 )搁置 Oh、2h、4h、10h、24h、48h、72h，模拟标 准溶 液工作液可能在较短的时问 内放置 的各种环境条 件 ，测定其稳定性结果。

1．3 测 定方 法

方法 采 用 反 向高 校 液 相 色谱 仪 ，色 谱 柱 ： AlltimaHP—C18 (4．6mmX150mm，5 m)；流 动相 ：乙腈 +水 (9+1)：乙酸乙酯，乙酸 乙酯 在 15min由 0增加至 100％；流速：1．0mL／min； 进样量 ：10~zL；柱温 ：30~C；检测波长 ：450nm， 测量叶黄素标准溶液响应峰面积值。

1．4 保存率的计算 ：

采用保存率考核叶黄素标准溶液稳定性 。 保存率 =即时校 正后折算 的浓度水平／初始 折算 的浓度水平 ×100；

1．5 统计学方法

运用成对 T检验对 叶黄素稳定性结果进行单 因素统计学分析。

2 研究思路

2．1 考察因素

本试 验 主 要从 溶 剂 、浓度 水 平、温度 、光 照 、和 时 间 五 方 面 因素 去 考 察 叶 黄 素 稳 定 性 研究 。 根据相关文献和标准方法 ]获得叶黄素 的标准溶液大多采用二氯 甲烷 、丙酮或者混合溶 剂 (正己烷 ：丙 酮 ：甲苯 ：乙醇 10：7：7：6) 等溶剂作为叶黄素的提取溶剂或标准溶液的配置 溶剂 ，遂选用此三种溶液作 为叶黄素标 准溶液稳 定性研究的溶解溶剂。