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细菌内毒素,又称之为“热原”,细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的独有构造,细菌在存活状态时不显现出来,唯有当细菌死亡自溶时才释放到细胞外,表现多种多样毒性作用,为区别于外毒素而称之为内毒素。细菌内毒素是由脂多糖(LPS)、蛋白质和磷脂构成的高分子量复合物,发挥毒性的成分主要为类脂质A(LipidA),类脂A是LPS活性无法缺失的一部分,可看作LPS的“生物活性核心”。内毒素处在细胞壁的最表层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各类细菌的内毒素的毒性作用较差,基本相同,可引发发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内血凝等。内毒素耐热性而比较稳定,抗原性弱。可影响机体产生抗体,但无中和作用,产生抗毒素,经甲醛处理无法变为类毒素。
20世纪60年代,现代人发现一种古老的海洋生物,被称作“海洋活化石”的鲎,它的血液与内毒素接触到后会产生特异性的凝集反应,现代人经过大量科学研究和实验从它的血液中提取出了用于检验内毒素的“鲎试剂”。内毒素检测单位为EU/ml。目前内毒素测定方法有:
将样本与鲎试剂在试管中混合,并使用干浴器,在37±1°C下,孵育60±2min,过程中不要振动。加热完成后,立即缓慢地将试管倾斜180°。如果凝胶已产生并能保持其完整性而不变形或塌陷,则结果可明确为阳性,而如果未产生凝胶则为阴性。在检验过程中,针对一系列样本,要开展多倍稀释(一般为2倍),以检查每个样品的结果是否为阳性。明确为阳性的最高有效稀释倍数或最低浓度被称作终点。
虽然此类方式能够检验出样品中LPS的种类并且能敏感地检验出样品中LPS的浓度,但是仍然无法准确地检验出有生物学作用的内毒素浓度。
ELISA法是目前新兴的内毒素检验方式,它是根据抗原抗体的酶联免疫测定法,从外加热原质影响巨噬细胞后产生的内热原物质如肿瘤坏死(TNF)因子白细胞介素1(IL-1)等而开展测定的。
生物传感器也是目前新兴的内毒素检验方式,大部分仍是根据鲎试验法中鲎阿米巴法溶解产物与内毒素的LPS地凝结反应。该类检测法具备测量速度快、敏感性高、最低检测限低等特点,目前,国内外有较多对生物传感器检验内毒素的科学研究。
细菌内毒素具备多种多样生物学活性,微量的内毒素进到机体可能产生发热、血压降低、寒颤、引发DIC、内毒素败血症等一系列临床反应,因此内毒素快速定量检验,对临床对症治疗具备很深的现实意义。
①内毒素检验不仅有助于鉴别是否为细菌感染,尤其是针对革兰阴性杆菌感染具备重要的参考价值,还能提示感染严重程度,可用于发热原因的快速辅助诊断。
②有利于临床及早诊治疾病,为选择用药提供一定理论依据,对病情开展动态监测,对给药后的疗效及预后判断具备重大意义。
③用于血液透析液的监测,针对保证治疗效果和患者安全有着重要作用。
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