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磷酸盐是生物化学研究中应用最普遍的一类缓冲剂,鉴于这些是二级解离,有2个pka值,因此 用这些配置的缓冲液,pH范畴最宽:
NaH2P04:pKa1=2.12,pKa2=7.21
Na2HP04:pKa1=7.21,pKa2=12.32
配酸性缓冲液:用NaH2P04,pH值为1~4。
配中性缓冲液:用混和的两类磷酸盐,pH值为6~8。
配碱性缓冲液:用Na2HP04,pH值为10~12。
磷酸盐缓冲液的优势为:
1.易于配置成多种浓度值的缓冲液;
2.适用的pH范畴宽;
3.pH受温度的干扰小;
4.缓冲液稀释后pH变动小,如稀释10倍后pH的变动低于0.1。
其劣势为:
1.易与常见的Ca2+、Mg2+以及重金属离子缔合生成沉积;
2.会能够抑制一些生物化学过程,如对一些酶的催化反应会形成某种程度的抑制作用。
Tris缓冲液在生物化学研究中应用的逐渐增多,有超出磷酸盐缓冲液的趋势,如在SDS-聚丙烯酷胶凝胶电泳中己都应用Tris缓冲液,而很少再用磷酸盐。
Tris缓冲液的常见合理有效pH范畴是在"中性"范畴,比如
Tris-HCl缓冲液pH值为7.5~8.5
Tris-磷酸盐缓冲液pH值为5.0~9.0
Tris-HCl缓冲液的优势是:
1.鉴于Tris碱的碱性较强,因此 能够仅用这一类缓冲体系,配置pH范畴由酸性到碱性的大范畴pH值的缓冲液;
2.对生物化学过程干扰非常小,不与钙离子及重金属离子产生沉积。
其劣势是:
1.缓冲液的pH值受溶液浓度干扰比较大,缓冲液稀释10倍,pH值的变动大于0.1;
2.温度效应大,温度变动对缓冲液pH值的干扰较大,比如4℃时缓冲液的pH值为8.4,则37℃时的pH值为7.4,因此 一定要在应用温度下开展配置,常温下配置的Tris-HCl缓冲液不可以用以0~4℃;
3.易吸附空气中的C02,因此 配置的缓冲液需盖严密封;
4.此缓冲液对一些pH电极产生相应的干扰效果,因此 要应用与Tris溶液具有兼容性的电极。
常见的合理有效pH范畴是:pH值为8.5~10.0,因此它是碱性范畴内最常见的缓冲液
优势是配置便捷,只应用一类实验试剂,劣势是能与很多代谢产物形成络合物,尤其是能与糖类的短基反应生成稳定的复合物而使缓冲液受到干扰。
此缓冲液应用的范畴宽,可用以pH值为2.0~11.0,比如最常见的有:
甘氨酸-HCl缓冲液:pH值为2.0~5.0。
甘氨酸-NaOH缓冲液:pH值为8.0~11.0。
甘氨酸-Tris缓冲液:pH值为8.0~11.0(此缓冲液用以普遍应用的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的电极缓冲液)。
组氨酸缓冲液:pH值为5.5~6.5。
甘氨酰胺(glycineamide)缓冲液:pH值为7.8~8.8。
甘氨酰甘氨酸(glycylglycine〉缓冲液:pH值为8.0~9.0。
该类缓冲体系的优势是:为细胞组分和多种提取液给予更贴近的纯天然环境。
其劣势是:①与羧酸盐和磷酸盐缓冲体系类似,也会干扰一些生物化学反应过程,如代谢过程等;②实验试剂的价格较高。
相关推荐:磷酸盐缓冲液,TrisHCl缓冲液,组氨酸
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