缘起：英国查处孔雀石绿 2005年6月5日，英国《星期日泰晤士报》

报道：英国食品标准局在英国一家知名的超市连锁店出售的鲑鱼（guīyú)体内发现 “孔雀石绿”。

有关方面将此事迅速通报给欧洲国家所有的食品安全机构，发出继“苏丹红1号”之后的又一起食品安全警报。 该消息一经传出，立即引起轩然大波。

2005年6月，《河南商报》记者对湖北、河南等地的养鱼场和水产品批发市场进行了调查，辽宁《华商晨报》记者对辽宁的养殖场和鱼药商店的调查结果都表明：在水产品的养殖过程中，很多渔民用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等；在运输过程中，为了使鳞受损的鱼延长生命，鱼贩也常使用孔雀石绿。至于卖孔雀石绿的鱼药商店，由于孔雀绿市场的存在，仍然在买卖孔雀石绿。              

2005年11月,继三款“珠江桥牌豆豉鲮鱼罐头”被查出含致癌物孔雀石绿后,香港食物环境卫生署公布的食物最新测试结果显示,“鹰金钱”牌金奖豆豉鲮鱼和甘竹牌豆豉鲮鱼等三个食物样本被查出含有致癌物“孔雀石绿”。

2006年，成都市水务局于11月28日、29日，先后在成都市青石桥水产市场、家乐福超市等市场和蒲江、崇州两地的养殖基地，抽取了10个桂花鱼样本(其中市场环节6个)送检。检测报告显示，3个样本检出禁用渔药孔雀石绿残留。

2006年11月17日,上海媒体率先报道了山东产多宝鱼药残超标情况。 2006年11月底，香港地区食环署食物安全中心对15个桂花鱼样本进行化验，结果发现11个样本含有孔雀石绿。尽管如此有问题的样本含孔雀石绿分量并不多，多数属"低"或"相当低"水平，但香港食环署仍呼吁市民暂时停食桂花鱼。

2007年4月,山东省日照市一养殖企业正式起诉台湾统一企业股份有限公司及其在山东青岛的独资企业青岛统一饲料农牧有限公司生产的饲料产品“孔雀石绿”超标,并要求赔偿750万元人民币。

2007年9月，广东省佛山市三水区农业局协同市农产品质量检测中心对三水区养殖户和水产孵化场专项检查发现，三水个别水产养殖户仍存在使用国家明令禁止使用渔药"孔雀石绿"，检查人员对这三宗违法使用"孔雀石绿"事件进行了查处。

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2014年9月，广东深圳一家批发商的黄骨鱼被查出孔雀石绿超标。

2017年国家食药总局的通告上，涉及北京、石家庄、沈阳、上海、南京、杭州、福州、济南、武汉、广州、西安11个市共31个批发市场的鳜鱼检出孔雀石绿。

2019年12月，福州市市场监督管理局网站发布2019年食品安全监督抽检信息通告第19期。其中有1批次桂花鱼不合格样品信息显示，抽样自福建永辉超市有限公司福州市台江区联信中心分店、由广东何氏水产有限公司生产的1批次桂花鱼样品被检出孔雀石绿项目不合格。

1992年，加拿大禁止水产养殖中使用孔雀石绿。

1993年，美国规定水产品中孔雀石绿不得检出。

2002年，我国农业部将孔雀石绿列入食品动物禁用兽药及化合物清单。 欧盟将孔雀石绿划归不得检出药物范畴。    

到底什么是孔雀石绿？？ 为什么会屡禁不止？？ 为什么会引起恐慌？？

一、 什么是孔雀石绿 属于人工合成的有机化合物，属于三苯甲烷类染料，被广泛应用于纺织业、皮革业、印刷业等领域。 孔雀石绿在甲状腺过氧化酶催化下，脱甲氧生成与芳香胺结构类似的初级和次级胺类代谢产物，可直接或酯化后与DNA反应，破坏DNA结构，从而引起癌变和基因突变。 脱氧化的胺类代谢物也可以通过降低四碘甲腺原氨酸(T4)水平，增加甲状腺激素(TSH)的含量，引起甲状腺功能的病变。 中文名称：孔雀石绿、严基块绿、苯胺绿、品绿、中国绿 英文名称: Malachite Green 分子式： C23H25ClN2 CAS NO.:569-64-2 孔石绿进入生物体内后，还原酶的催化下，迅速降解成脂溶性的无色孔石绿而在各组织部位长期留存。 因此，用药后的鱼、虾等水产品中检测到的残留物主要是无色孔石绿。 中文名称:无色孔雀石绿、隐色孔雀石绿 英文名称: Leucomalachite Green CAS NO.:129-73-7 分子式：C23H26N2

二、 检测技术概述

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酶联免是基于抗原抗体反应进行竞争性抑制测定。 样品中的MG或LMG经过提取净化，LMG被氧化剂转化为MG，竞争结合板上包被的MG抗体，用过量酶标记物标记，加入HRP底物(TMP)显色，最后酶标仪450nm波长处测定吸光值，进行含量计算。 样品中MG或LMG的含量越低，结合的酶越多，板颜色越深；反之，颜色越浅。 伟业计量官网 www.bzwz.com 行业标准查询、下载

胶体金免疫是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术。 样品待测液中的MG或LMG，在NC微孔膜的作用下层析，药物与NC膜上测试线竞争结合金标抗体，最终通过测试线的颜色深浅来定性判定样品中的药物含量。

液相色谱法(HPLC)是样品中(包括目标物在内)各组分对固定相和流动相的亲和力差异，实现组分的分离和测定。 《GB/T 19857-2005水产品中孔在石绿和结晶紫残留量的测定》和《SC/T 3021-2004水产品中孔在石绿残留量的测定液相色谱法)(LC-UV)，采用柱后衍生法，利用二氧化铅柱氧化LMG，紫外检测器进行测定。 《GB/T 20361-2006水产品中孔在石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色荧光检测法》，采用柱前衍生法，利用硼氢化钾还原MG，荧光检测器进行测定。

液相色语串联质谱法(HPLC- MS/MS)是样品中各组分经色谱分离后，化合物分子电离成特定质荷比的离子，进入质量分析器同时实现目标物的定量和定性分析。 目前国内检测工作主要参考方法《GB/T 19857-2005水产品中孔石绿和结晶紫残留量的测定》。

悬液芯片法：需借助美国Bio-Rad公司悬液芯片系统，通过抗原抗体反应，最终通过检测荧光强度的一种方法。【深圳市疾控中心分子生物研究室】

三、常用检测方法分析

GB/T 20361-2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法 GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定

原理：样品中残留的孔雀石绿或结晶紫用硼氢化钾还原为其相应的代谢产物隐色孔雀石绿或隐色结晶紫，乙腈-乙酸铵缓冲混合液提取，二氯甲烷液液萃取，固相萃取柱净化，反相色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。 试验及所用溶液 试剂：乙腈、二氯甲烷、酸性氧化铝  、二甘醇  、硼氢   化钾 、无水乙酸铵、冰乙酸、氨水 溶液：硼氢化钾溶液（0.03mol/L）、硼氢化钾溶液（0.2mol/L）、20%盐酸羟胺溶液、对甲苯磺酸溶液（0.05mol/L）、乙酸铵缓冲液（0.1mol/L）、乙酸铵缓冲液（0.125mol/L） 酸性氧化铝固相萃取柱、Varian PRS柱  、标准品

实验步骤

（一）提取

1. 称取5.00g样品于50mL塑料离心管，使用瓶口分液器加入10mL乙腈，玻璃棒匀浆提取（捣碎）1min，加入5g酸性氧化铝，振荡2min，离心机4000r/min离心10min，上清液转移至250mL分液漏斗中，在分液漏斗中加入2mL二甘醇，3mL硼氢化钾溶液（0.2mol/L），振摇2min。  

  2. 另取50mL离心管，使用瓶口分液器加入10mL乙腈，洗涤对应编号玻璃棒，洗涤液移入前一转移上清液的离心管中，加入3mL硼氢化钾溶液（0.2mol/L），盖上盖子摇碎离心管中的沉淀，漩涡混匀器上振荡1min，静置20min，离心机4000r/min离心10min，上清液并入250mL分液漏斗中。

3. 在50mL离心管中继续加入1.5mL盐酸羟胺溶液（20%）、2.5mL对-甲苯磺酸溶液（0.05mol/L）、5.0mL乙酸铵缓冲溶液（0.125mol/L），振荡2min，使用瓶口分液器加入10mL乙腈，继续振荡2min，离心机4000r/min离心10min，上清液并入250mL分液漏斗中，然后再重复步骤3操作一次。

4. 使用5mL一次性吸管在分液漏斗中加入30mL二氯甲烷，具塞，剧烈振摇2min，静置分层，将下层溶液转移至250mL茄形瓶中，继续在分液漏斗中加入5mL乙腈、10mL二氯甲烷，振摇2min，把全部溶液转移至新的50mL离心管中，离心机4000r/min离心10min，使用5mL一次性吸管转移下层溶液至250mL茄形瓶中，45°C旋转蒸发至近干，用2.5mL乙腈溶解残渣。

（二）净化

1. 将PRS柱安装在固相萃取装置上，上端使用转接头连接酸性氧化铝固相萃取柱，用5mL乙腈活化。

2. 使用5mL一次性吸管转移提取液到柱上，再用2.5mL乙腈洗茄形瓶两次，每次2.5mL，依次过柱。

3. 弃去酸性氧化铝柱，吹PRS柱近干，在不抽真空的情况下，加入3mL等体积混合的乙腈和乙酸铵溶液（0.1mol/L），收集洗脱液，乙腈定容至3mL，过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。

（1）KBH4溶液易分解，需随用随配。配制溶液的质量分数4%-6%，保证样品中MG被充分还原成LMG。

（2）使用二氯甲烷液液萃取时，要及时放气。分层不明显时，加适量超纯水或二氯甲烷，使二氯甲烷处于下层。 三、常用检测方法分析

（3）提取液旋转蒸发严格控制温度，蒸馏速度过快会导致药物被带出；蒸发太干，时间太长会导致回收率下降。

（4）加入乙腈溶解圆底烧瓶中的提取残渣时，要充分旋涡，用胶头滴管反复淋洗烧瓶壁，使其充分溶解后，再上固相萃取柱净化处理。 三、常用检测方法分析

（5）固相萃取柱保证柱床湿润，避免有气泡影响溶剂的通过性；洗脱前先移出氧化铝柱，再抽干PRS柱，防止杂质造成污染。

（6）收集的洗脱液浑浊时可适当稀释或冷冻离心处理，滤膜过滤时液体不要接触注射器的活塞部分，避免引入荧光干扰物。 检测对象：LMG 、 LCV